[发明专利]一种检测血清中11种抗肿瘤药物浓度的方法

权利要求书

1.一种检测血清中11种抗肿瘤药物浓度的方法，其特征在于：将待测血清样本进行预处理后，先利用超高效液相色谱将待测物与血清基质分离，再利用质谱内标定量法，根据已经建立的校准曲线，计算得到11种抗肿瘤药物的含量；

所述预处理是向待测血清样本中加入含内标的蛋白沉淀剂，经振荡、离心后取上清，所述蛋白沉淀剂为甲醇与乙腈的混合溶液，甲醇与乙腈体积比为1: 1~3；

所述校准曲线是以标准品与内标物的浓度比为X轴、标准品与内标物的峰面积比为Y轴，建立；

所述11种抗肿瘤药物为：卡培他滨、阿法替尼、他莫昔芬、吉非替尼、伊马替尼、舒尼替尼、厄洛替尼、N-去乙基舒尼替尼、盐酸埃克替尼、阿帕替尼和克唑替尼；

所采用的色谱条件如下：

（1）超高效液相色谱条件：

流动相A为0.01%~0.2%甲酸和1mM~3mM乙酸铵水溶液的混合溶液，流动相B为乙腈；

色谱柱为Phenomenex Kinetex XB-C18，型号为3.0×50 mm, 2.6µm；

采用流动相A和流动相B为混合流动相进行梯度洗脱的方式，流动相A和流动相B的初始比例为85~100:25~0，梯度洗脱过程如下：在0-1.0分钟内，流动相A和流动相B的体积比由85~100:25~0匀速渐变至70:30，在1.0-3.0分钟内，流动相A和流动相B的体积比由70:30匀速渐变至2:98，在3.0-4.0分钟内，流动相A和流动相B的体积比保持为2:98，在4.0-6.5分钟内，流动相A和流动相B的体积比由2:98变至初始比例，每个样品采集时间为6.5分钟；

流速为0.2~0.4mL/min，柱温为40~50℃，进样体积为0.2~2µL；

（2）质谱条件：

在电喷雾电离正离子检测模式下，采用多反应监测的质谱扫描模式，毛细管电压为3.0kV ESI+；干燥气温度为300℃；雾化气压力为45 psi，鞘气温度350℃，鞘气流速11L/min。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述11种抗肿瘤药物对应的内标物为：卡培他滨-d11、阿法替尼-d6、他莫昔芬-d5、吉非替尼-d3、伊马替尼-d8、舒尼替尼-d4、N-去乙基舒尼替尼-d5、阿帕替尼-d8和克唑替尼-d5。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述流动相A为0.1%甲酸和2mM乙酸铵水溶液的混合溶液，流动相B为乙腈，流动相A和流动相B的初始比例为99:1。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述流速为0.3mL/min，柱温为45℃，进样体积为1µL。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述蛋白沉淀剂中甲醇与乙腈的体积比为1:2。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述预处理的具体过程是：取50 μL血清于1.5 mL离心管中，向其中加入200 μL含内标的蛋白沉淀剂，振荡3~10 min，在12000~15000r/min，4~20℃离心4~10 min后，取上清。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述含内标的蛋白沉淀剂是将内标溶液加入至蛋白沉淀剂中后得到，内标溶液与蛋白沉淀剂的体积比为 0.1~0.3 : 19.9~19.7；所述内标溶液中内标物的浓度为：卡培他滨-d11 1000 ng/mL、阿法替尼-d6 5000 ng/mL、他莫昔芬-d5 500 ng/mL、吉非替尼-d3 2000 ng/mL、伊马替尼-d8 5000 ng/mL、舒尼替尼-d4400 ng/mL、N-去乙基舒尼替尼-d5 400 ng/mL、阿帕替尼-d8 2000 ng/mL和克唑替尼-d52000 ng/mL。