[发明专利]一种黄花菜抗肿瘤活性蛋白及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种黄花菜抗肿瘤活性蛋白，其特征在于，通过包括如下步骤的方法制得：

步骤1，取干黄花菜，剪碎后，加入蛋白提取液，4℃下浸泡并搅拌过夜，离心30min后取上清液，即为黄花菜蛋白粗提液；所述蛋白提取液为磷酸缓冲液；

步骤2，在黄花菜蛋白粗提取液中边搅拌边加入5倍体积的-20℃预冷的丙酮，-20℃沉淀蛋白1-2小时，4℃离心30min，收集沉淀，用丙酮清洗沉淀2-3次，沉淀风干，得到黄花菜粗蛋白；

步骤3，将黄花菜粗蛋白用pH 7.4的Tris-HCl缓冲液在冰上溶解，离心30min后取上清液，按0℃下的硫酸铵溶液饱和度计算表，加入60％饱和度的硫酸铵粉末，充分搅拌溶解后，静置40min，离心30分钟收集沉淀，沉淀用pH 7.4的Tris-HCl缓冲液溶解，离心，收集上清，然后将其装入透析袋中，透析24小时，浓缩后冷冻干燥，即得到黄花菜抗肿瘤粗蛋白；

步骤4，将上述黄花菜抗肿瘤粗蛋白溶解于Tris-HCl缓冲液中，离心后取上清液，加入到SP阳离子交换层析柱，用pH 7.4的Tris-HCl缓冲液洗柱子，再用0.02mol/L和0.04mol/L的NaCl溶液洗脱后，收集洗脱液；

步骤5，将上述洗脱液再一次过SP阳离子交换层析柱，用pH 7.4的Tris-HCl缓冲液洗柱子，再用0.02mol/L和0.04mol/L的NaCl溶液洗脱后，收集洗脱液，然后浓缩，即为黄花菜抗肿瘤活性蛋白。

2.根据权利要求1所述的一种黄花菜抗肿瘤活性蛋白，其特征在于：所述步骤1中黄花菜和蛋白提取液的质量比为1:3-6，所述蛋白提取液为pH7.4的磷酸缓冲液。

3.根据权利要求1所述的一种黄花菜抗肿瘤活性蛋白，其特征在于：所述步骤1中黄花菜和蛋白提取液的质量比为1:5。

4.根据权利要求1所述的一种黄花菜抗肿瘤活性蛋白，其特征在于：所述步骤1、3、4、5均在0-4℃条件下进行。

5.一种权利要求1所述的黄花菜抗肿瘤活性蛋白在制备抗肝癌、大肠癌、乳腺癌、宫颈癌以及卵巢腺癌药物中的应用。