[发明专利]一种尿液中修饰核苷及肌酐同时测定的方法

权利要求书

1.尿液中修饰核苷及肌酐的同时检测方法，包括以下步骤：

(1)尿样预处理制备得到待测样本；

(2)待测混合标准溶液制备：称取修饰核苷标准品和肌酐标准品，溶解稀释得到不同浓度的标准溶液；称取同位素内标物，溶解稀释得到一定浓度的内标溶液；将上述标准品溶液与内标溶液进行混合得到待测混合标准溶液；

(3)将待测样本和待测混合标准溶液进行液质联用检测，得到修饰核苷的种类和含量；

任选的，步骤(1)待测样本中还可以加入内标物。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，修饰核苷标准品含有腺苷、鸟苷、胞苷、肌苷、N6-甲基腺苷、5-甲基胞苷、3-甲基胞苷、5-甲基尿苷、3-甲基尿苷、N,N-二甲基鸟苷、假尿嘧啶核苷、尿苷、1-甲基鸟苷、1-甲基腺苷、6-O-甲基鸟苷、1-甲基次黄苷、N4-乙酰胞苷和肌酐。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，同位素内标物为N¹⁵-2’脱氧腺苷和d³-肌酐。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，尿样预处理包括沉淀蛋白并分离、稀释等步骤。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，液质联用检测条件为：采用极性嵌入键合固定相色谱柱，流动相A为水(含0.1％甲酸)，流动相B为乙腈(含0.1％甲酸)，采用离子源为ESI，正离子多反应监测扫描。

6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，尿样预处理包括将尿样离心取上清液，用冰乙腈沉淀蛋白，涡旋震荡，离心弃去蛋白沉淀，取上清液并用初始流动相稀释尿样上清液，离心，用0.22μm的滤膜过滤上清液。

7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，液质联用检测条件中，梯度洗脱程序为0-2min，A：99％～99％、B：1％～1％；2-7min，A：99～80％、B：1～20％；7-7.01min，A：80～5％、B：20-95％；7.01-10min，A：5％～5％、B：95％～95％；10-10.01min，A：5％～95％、B：95％～1％；10.01-13min，A：99％～99％、B：1％～1％。

8.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，极性嵌入键合固定相色谱柱规格为3μm*150mm*2.1mm。