[发明专利]一种含有蛋白的保护剂及间充质干细胞因子的保存方法

权利要求书

1.一种含有蛋白的保护剂，其特征在于：该保护剂包含1-5g/L的大豆肽、1-5g/L的人参肽、0.5-1.5g/L的白蛋白、0.5-1.5g/L的谷胱甘肽、0.7-1.2g/L的谷氨酰胺、80-120IU/ML的表皮细胞生长因子与80-120IU/ML的成纤维细胞生长因子。

2.根据权利要求1所述的含有蛋白的保护剂，其特征在于：所述的保护剂包含1-5g/L的大豆肽、1-5g/L的人参肽、1-1.5g/L的白蛋白、1-1.5g/L的谷胱甘肽、1-1.2g/L的谷氨酰胺、80-120IU/ML的表皮细胞生长因子与80-120IU/ML的成纤维细胞生长因子。

3.一种间充质干细胞因子的保存方法，其特征在于：包括如下步骤：

(1)脐带组织培养：将组织块接种于培养瓶底部，然后添加培养液，培养7-8天后，组织块周围有成纤维状细胞爬出，去除组织块更换培养液继续培养1-2天，培养得到的细胞为P0，将贴壁细胞转移到其他培养瓶中培养，培养得到的细胞为P1；

(2)间充质干细胞传代培养：将P1细胞传代培养至P6，收集P2至P6细胞的培养上清液，在P2至P6细胞的培养基中加入权利要求1或2所述的保护剂，然后置于温度为35-40℃、CO₂浓度为3-8％的条件下培养，培养至细胞融合度达到70-90％时，将细胞进行水浴热激，然后在低压氧仓中处理5-20分钟，再放入低氧环境中处理5-20分钟，然后取出继续培养；

(3)间充质干细胞培养上清离心、纯化和过滤除菌：将所述的步骤(2)中收集的培养上清液进行高速离心，收集离心后上清液进行浓缩、除菌；

(4)长效细胞因子的制备：在所述的步骤(3)中除菌后的浓缩液中加入权利要求1或2所述的保护剂，经充分混合后即成。

4.根据权利要求3所述的间充质干细胞因子的保存方法，其特征在于：所述的步骤(1)中的培养液为含1％血清替代物的DMEM/F12。

5.根据权利要求3所述的间充质干细胞因子的保存方法，其特征在于：所述的步骤(2)中的水浴热激步骤的温度为38-42℃，时间为5-15分钟。

6.根据权利要求3所述的间充质干细胞因子的保存方法，其特征在于：所述的步骤(2)中的低压氧仓的压力为10-12KPa；所述的步骤(2)中的低氧环境的氧气浓度为15-18％。

7.根据权利要求3所述的间充质干细胞因子的保存方法，其特征在于：所述的步骤(2)中的保护剂在P2至P6细胞的培养基的终浓度为1-5g/L；所述的步骤(4)中的保护剂在浓缩液中的终浓度为1-5g/L。

8.根据权利要求3所述的间充质干细胞因子的保存方法，其特征在于：所述的步骤(3)中的离心步骤的转速为3000-5000r/min，时间为20-30分钟；所述的步骤(3)中的除菌后的上清液储存于-20--80℃的条件下。

9.根据权利要求3所述的间充质干细胞因子的保存方法，其特征在于：所述的步骤(3)中间充质干细胞培养上清离心、纯化和过滤除菌的具体步骤为：将收集的培养上清液于室温解冻，通过滤膜过滤掉参与细胞，然后超滤收集分子量在3-30KD的细胞因子的浓缩液，通过滤膜过滤除菌，将浓缩液收集。

10.根据权利要求3所述的间充质干细胞因子的保存方法，其特征在于：所述的步骤(4)中混合步骤后将得到的间充质干细胞因子溶液存储于温度为2-8℃的环境中。