[发明专利]一种含有蛋白的保护剂及间充质干细胞因子的保存方法

说明书

本发明提供了一种含有蛋白的保护剂及间充质干细胞因子的保存方法，一种含有蛋白的保护剂，该保护剂包含1‑5g/L的大豆肽、1‑5g/L的人参肽、0.5‑1.5g/L的白蛋白、0.5‑1.5g/L的谷胱甘肽、0.7‑1.2g/L的谷氨酰胺、80‑120IU/ML的表皮细胞生长因子与80‑120IU/ML的成纤维细胞生长因子。本发明所述的间充质干细胞因子的保存方法采用人脐带间充质干细胞作为活性细胞因子的来源，间充质干细胞的上清液中富含表皮生长因子、血管内皮生长因子和干细胞因子等活性因子成分，该活性因子能够促进体内干细胞的生长和增殖，促进肠道内的细胞组织等加快增殖速度。

技术领域

本发明属于生物干细胞领域，尤其是涉及一种含有蛋白的保护剂及间充质干细胞因子的保存方法。

背景技术

间充质干细胞是指具有三胚层分化潜能的一类干细胞亚群，在特定环境下，理论上可以诱导分化为人体任何一种组织细胞，主要来源于人体中广泛存在的间质组织，特别是骨髓、脂肪、脐带和胎盘等，由于其具有强大的增殖能力，较强的分化能力，低免疫原性和免疫调节功能，其在临床上的应用价值越来越受人们关注。随着对间充质干细胞研究的不断深入，其分泌因子已成为研究的热点。间充质干细胞可以分泌多种细胞因子，这些细胞因子可有效地调控机体细胞信号传导、活化人体干细胞，进而生理性修复或替代机体损伤、病变及衰老的细胞。

有研究表明在培养的过程中脐带间充质干细胞能分泌多种细胞因子，如分泌表皮生长因子(Epidermal Growth Factor，EGF)，肝细胞生长因子(Hepatocyte GrowthFactor，HGF)，肿瘤坏死因子(Tumor Necrosis Factor，TNF)，血管内皮生长因子(Vascularendothelial Growth Factor，VEGF)，神经生长因子(Nerve Growth Factor，NGF)等，这些细胞因子都能在一定程度上促进皮肤细胞生长、改善细胞生长微环境、促进伤口愈合、延缓衰老、改善皮肤生长状态等作用,但是间充质干细胞因子长期保存的话其活性普遍下降，使用效果减弱，因此如何制备一种可长效保存间充质干细胞因子成为了本领域技术人员亟待解决的问题。

发明内容

有鉴于此，本发明旨在克服现有技术中的缺陷，提出一种含有蛋白的保护剂及间充质干细胞因子的保存方法。

为达到上述目的，本发明的技术方案是这样实现的：

一种含有蛋白的保护剂，该保护剂包含1-5g/L的大豆肽、1-5g/L的人参肽、0.5-1.5g/L的白蛋白、0.5-1.5g/L的谷胱甘肽、0.7-1.2g/L的谷氨酰胺、80-120IU/ML的表皮细胞生长因子与80-120IU/ML的成纤维细胞生长因子。

优选的，所述的保护剂包含1-5g/L的大豆肽、1-5g/L的人参肽、1-1.5g/L的白蛋白、1-1.5g/L的谷胱甘肽、1-1.2g/L的谷氨酰胺、80-120IU/ML的表皮细胞生长因子与80-120IU/ML的成纤维细胞生长因子。

一种含有蛋白的保护剂的制备方法：包括如下步骤：将大豆肽、人参肽、白蛋白、谷胱甘肽、谷氨酰胺、表皮细胞生长因子与成纤维细胞生长因子混合均匀后即得。

一种间充质干细胞因子的保存方法，包括如下步骤：

(1)脐带组织培养：将组织块接种于培养瓶底部，然后添加培养液，培养7-8天后，组织块周围有成纤维状细胞爬出，去除组织块更换培养液继续培养1-2天，培养得到的细胞为P0，将贴壁细胞转移到其他培养瓶中培养，培养得到的细胞为P1；

(2)间充质干细胞传代培养：将P1细胞传代培养至P6，收集P2至P6细胞的培养上清液，在P2至P6细胞的培养基中加入权利要求1或2所述的保护剂，然后置于温度为35-40℃、CO₂浓度为3-8％的条件下培养，培养至细胞融合度达到70-90％时，将细胞进行水浴热激，然后在低压氧仓中处理5-20分钟，再放入低氧环境中处理5-20分钟，然后取出继续培养；