[发明专利]新型鸭呼肠弧病毒卵黄抗体及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种新型鸭呼肠孤病毒(NovelDuck Reovirus)病卵黄抗体的制备方法，其特征在于，包括：

(Ⅰ)制备新型鸭呼肠孤病毒抗原；

(Ⅱ)将制备的新型鸭呼肠孤病毒抗原灭活后加油佐剂混合乳化制备得到新型鸭呼肠孤病毒病灭活疫苗；

(Ⅲ)用灭活疫苗免疫产蛋鸡，收集高免鸡蛋，采用辛酸-黄原胶法提取卵黄抗体，即得；

所述辛酸-黄原胶法提取的卵黄抗体的方法包括：

(1)蛋壳消毒后进行蛋黄分离，收集卵黄；

(2)除脂：将卵黄和黄原胶水溶液混匀，静置，得上清液备用；

(3)萃取：向上清液中加入正辛酸，静置，取上清液过滤，滤液调至pH7.2；

(4)过滤、浓缩、灭活，即得。

2.按照权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(Ⅰ)所述的新型鸭呼肠孤病毒抗原的制备方法包括，将新型鸭呼肠孤病毒疫苗株接种鸡肝癌细胞，培养后收获细胞液，即得。

3.按照权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(Ⅱ)中所述的制备新型鸭呼肠孤病毒病灭活疫苗的方法包括，

(a)油相制备；将白油和硬脂酸铝混合均匀后加热再加入司本-80再升温加热后冷却，即得；

(b)水相制备：将灭活后的新型鸭呼肠孤病毒抗原与吐温-80混合至吐温-80完全溶解混匀均匀；

(c)乳化：将油相和水相混合乳化，即得。

4.按照权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤(a)中将注射用白油、硬脂酸铝以95份:1份的比例混匀并加热至80℃，再加入5份司本-80至温度达到115℃时维持40min，冷却后备用；步骤(b)中将灭活的病毒抗原与吐温-80按95:5的比例混合，再搅拌20～30min，使吐温-80完全溶解混匀；步骤(c)中将油相和水相以1:2比例乳化30min。

5.按照权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(Ⅲ)中所述的用灭活疫苗免疫产蛋鸡的免疫程序为：(a)基础免疫：新型鸭呼肠孤病毒油乳佐剂免疫原皮下注射健康产蛋鸡，每只1.0ml；(b)加强免疫：基础免疫21日后，皮下注射相同的油乳佐剂免疫原，每只1.5ml；(c)强化免疫：加强免疫21日后，皮下注射相同的油乳佐剂免疫原，每只2.0ml；(d)维持免疫：在强化免疫接种后根据抗体效价，每隔2～3个月再加强接种1次，每只2.0ml。

6.按照权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(Ⅲ)中所述的收集高免蛋的方法为：产蛋鸡强化免疫接种结束后10日，每隔5日抽样测定高免新型鸭呼肠孤病毒蛋黄中抗体效价，当中和效价不低于1:1024时，收集高免蛋。

7.按照权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，按照体积比计，将卵黄和终浓度为0.1％的黄原胶水溶液按照1：2的比例混匀并调至pH5.2，置2～8℃静置16小时；

步骤(3)中向上清液中加入终浓度2％正辛酸，室温静置4小时取上清液过滤；

步骤(4)所述的过滤是将加辛酸处理好的卵黄上清液用孔径为1.0μm和0.45μm的筒式滤芯过滤；所述的浓缩是经截留分子量为100kD的中空纤维超滤柱进行浓缩10倍；所述的灭活是按终浓度为0.05％加入甲醛溶液，充分搅拌混匀，室温灭活24小时。

8.由权利要求1-7任何一项制备方法得到的新型鸭呼肠孤病毒病卵黄抗体。

9.权利要求8所述的新型鸭呼肠孤病毒病卵黄抗体在制备预防由新型鸭呼肠孤病毒引起的疾病药物中的用途。