[发明专利]一种水稻中转基因的检测方法

权利要求书

1.一种水稻中转基因的检测方法，其特征在于：包括以下步骤，

(1)准备测定的主要仪器；

(2)对样品进行制样；

(3)对水稻中的DNA模板制备；

(4)对水稻中的DNA浓度测定；

(5)对检测结果分析和判定。

2.根据权利要求1所述的一种水稻中转基因的检测方法，其特征在于：所述步骤(1)中，主要仪器：定量PCR仪；冷冻研磨仪；消毒灭菌锅；制冰机；核酸蛋白分析仪；高速冷冻离心机，台式小型离心机，Mini个人离心机；低温冰箱；旋涡振荡器和微量移液器。

3.根据权利要求1所述的一种水稻中转基因的检测方法，其特征在于：所述步骤(2)中，称取约200g水稻样品，用粉碎机或冷冻研磨仪将样品粉碎至细粉状。

4.根据权利要求1所述的一种水稻中转基因的检测方法，其特征在于：所述步骤(3)中，DNA模板制备：每个样品提取2个平行管，称取200mg粉碎的样品，加入1mL预冷至4℃的抽提液，剧烈摇动，棍匀后，在冰上静置5min,4℃条件下10OOOg离心15min，弃上清液，放入600μL预热到65℃的裂解液，充分重悬沉淀，在65℃恒温保持40min，期间颠倒棍匀5次；室温条件下，10OOOg离心10min，取上清液转至另一新离心管中；加入5μLRNaseA，37℃恒温保持30min，分别用等体积苯酣g异戊醇洛液和三氯甲皖z异戊醇榕液各抽提一次；室温条件下，10OOOg离心10min，取上清液转至另一新离心管中；加入三分之二体积异丙醇，十分之一体积3mol/L乙酸饷溶液，零下20℃放置2h-3h；在4℃条件下，10OOOg离心15min，弃上清液，用70％乙醇洗涤沉淀一次，倒出乙醇，晾干沉淀，加入50μL TE溶解沉淀，所得溶液即为样品DNA梅液。

5.根据权利要求1所述的一种水稻中转基因的检测方法，其特征在于：所述步骤(4)中，采用紫外分光光度法测定DNA浓度，所测得OD值为核酸总量，紫外分光光度法检测核酸浓度的最佳范围是2μg/mL-50μg/mL,OD值应该在0.05-l的区间内，将DNA溶液做适当的稀释，放入紫外分光光度计的比色皿中，于260nm处测定其吸收峰，lOD2sonm＝50μg/mL双链DNA或38μg/mL单链DNA，PCR级DNA搭液的OD2sonm/0D2som比值为1.7：2.0。

6.根据权利要求1所述的一种水稻中转基因的检测方法，其特征在于：所述步骤(5)中，检测结果分析：按预先设定的样品摆放顺序将PCR反应管依次摆放，开始运行仪器进行实时荧光PCR反应，实时荧光PCR反应结束后，设置荧光信号|萄值，阔值设定原则根据仪器噪声情况进行调整，以阔值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的最高点为准。

7.根据权利要求1所述的一种水稻中转基因的检测方法，其特征在于：所述步骤(5)中，结果判定：测试样品外源基因检测Ct值等于40，判断该样品不含所检的外源基因；

测试样品外源基因检测Ct值小于或等于36，判断该样品含有所检测的外源基因；

测试测试样品外源基因检测Ct值在36-40之间，应调整模块浓度，重新做实时荧光PCR，再次扩增后的外游、基因检测Ct值仍小于40，则可判定为改样品检出外源转基因，再次扩增后的外游、基因检测Ct值等于40，则可判定为改样品未检出外源转基因。