[发明专利]一种水稻中转基因的检测方法

说明书

本发明公开一种水稻中转基因的检测方法，应用TaqMan探针技术，根据常用的筛选基因序列、构建特异性序列、转化体特异性序列和水稻内源基因序列，设计引物和荧光探针，对试样中基因组DNA进行PCR扩增。在PCR反应过程中，荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步，因此可根据荧光信号的强度判定样品中是否含有特定的基因，此方法检测稳定，且准确。本发明解决了对水稻中转基因成分的检测不规范和不准确的问题。

技术领域

本发明涉及农药残留的测定技术领域，具体为一种水稻中转基因的检测方法。

背景技术

食品，指各种供人食用或者饮用的成品和原料以及按照传统既是食品又是中药材的物品，但是不包括以治疗为目的的物品。对食品的定义为：可供人类食用或饮用的物质，包括加工食品，半成品和未加工食品，不包括烟草或只作药品用的物质。

转基因技术是指利用DNA重组、转化等技术将特定的外源目的基因转移到受体生物中，并使之产生可预期的、定向的遗传改变。转基因技术应用在人类社会各个领域中，较为常见的包括了利用转基因技术生产的农作物，以及利用转基因技术生产疫苗等。含有转基因作物成分的食品被称之为转基因食品，目前市场上对转基因产品越来越重视，尤其水稻方面的转基因，大米是我国人民的主要主食之一，对水稻中的转基因的检测也越发的重要，因此，我们设计了一种水稻中转基因的检测方法。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明提供了一种水稻中转基因的检测方法，解决了对水稻中转基因成分的检测不规范和不准确的问题。

为了达到上述目的，本发明所采用的技术方案是：

一种水稻中转基因的检测方法，其特征在于：包括以下步骤，

(1)准备测定的主要仪器；

(2)对样品进行制样；

(3)对水稻中的DNA模板制备；

(4)对水稻中的DNA浓度测定；

(5)对检测结果分析和判定。

前述的一种水稻中转基因的检测方法，所述步骤(1)中，主要仪器：定量PCR仪；冷冻研磨仪；消毒灭菌锅；制冰机；核酸蛋白分析仪；高速冷冻离心机，台式小型离心机，Mini个人离心机；低温冰箱；旋涡振荡器和微量移液器。

前述的一种水稻中转基因的检测方法，所述步骤(2)中，称取约200g水稻样品，用粉碎机或冷冻研磨仪将样品粉碎至细粉状。

前述的一种水稻中转基因的检测方法，所述步骤(3)中，DNA模板制备：每个样品提取2个平行管，称取200mg粉碎的样品，加入1mL预冷至4℃的抽提液，剧烈摇动，棍匀后，在冰上静置5min,4℃条件下10OOOg离心15min，弃上清液，放入600μL预热到65℃的裂解液，充分重悬沉淀，在65℃恒温保持40min，期间颠倒棍匀5次；室温条件下，10OOOg离心10min，取上清液转至另一新离心管中；加入5μL RNaseA，37℃恒温保持30min，分别用等体积苯酣10g异戊醇洛液和三氯甲皖异戊醇榕液各抽提一次；室温条件下，10OOOg离心10min，取上清液转至另一新离心管中；加入三分之二体积异丙醇，十分之一体积3mol/L乙酸饷溶液，零下20℃放置2h-3h；在4℃条件下，10OOOg离心15min，弃上清液，用70％乙醇洗涤沉淀一次，倒出乙醇，晾干沉淀，加入50μL TE溶解沉淀，所得溶液即为样品DNA梅液。

前述的一种水稻中转基因的检测方法，所述步骤(4)中，采用紫外分光光度法测定DNA浓度，所测得OD值为核酸总量，紫外分光光度法检测核酸浓度的最佳范围是2μg/mL-50μg/mL,OD值应该在0.05-l的区间内，将DNA 溶液做适当的稀释，放入紫外分光光度计的比色皿中，于260nm处测定其吸收峰，lOD2sonm＝50μg/mL双链DNA或38μg/mL单链DNA，PCR级DNA搭液的OD2sonm/0D2som比值为1.7：2.0。