[发明专利]一种基于二代测序的人类Y-STR检测方法及其应用

权利要求书

1.一种基于二代测序的人类Y-STR检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1、根据中国人群STR群体遗传多态性分析结果，最终筛选获得88个Y染色体基因座，分别为DYS19、DYF371a/b/c/d、DYS385a/b、DYF387S1a/b、DYS388、DYS389-I、DYS389-II、DYS390、DYS391、DYS392、DYS393、DYF397S1a/b、DYF399S1a/b/c、DYF403S1a1/a2/b1/b2、DYF404S1a/b、DYS425a/b/c/d、DYS437、DYS438、DYS439、DYS443、DYS444、DYS446、DYS447、DYS448、DYS449、DYS456、DYS458、DYS459a/b、DYS460、DYS464a/b/c/d、DYS481、DYS485、DYS504、DYS505、DYS508、DYS510、DYS518、DYS520、DYS522、DYS526a/b、DYS527a/b、DYS531、DYS533、DYS549、DYS552、DYS557、DYS570、DYS576、DYS587、DYS593、DYS596、DYS612、DYS617、DYS622、DYS626、DYS627、DYS630、DYS635、DYS641、DYS643、DYS644、DYS645、DYS710、DYS720、DYS722、Y-GATA-A10、Y-GATA-H4；

S2、根据基因座的序列信息，设计引物，用于扩增基因座序列；

S3、根据步骤S2设计的引物构建基因文库；

S4、将步骤S3构建的基因文库进行测序，并对测序数据进行分析，即可。

2.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤S2所述的引物及各引物在进行PCR扩增时的引物浓度如下表1所示。

表1不同基因座的引物序列及浓度

3.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤S3所述的构建基因文库的具体过程为：

(1)多重PCR预混液的配制及PCR扩增：引物混合液10μL，多重PCR扩增缓冲液4μL，模板DNA 1～100ng，加无菌超纯水至总反应体系20μL，按下列程序进行PCR反应：95℃，3min；95℃ 15s，72℃ 90s，28个循环；72℃ 10min；4℃保存，制得PCR产物；

(2)将步骤(1)制得的PCR产物进行消化：取步骤S1制得的PCR产物20μL，向其中加入消化缓冲液2μL，按下列程序消化：50℃ 10min，55℃ 10min，60℃ 20min，10℃保存，制得消化产物；

(3)接头连接：按下列反应配制反应混合液：步骤(2)制得的消化产物22μL，连接缓冲液6μL，接头1μL，连接酶1μL，总体系为30μL，并按以下反应进行连接：22℃ 30min，72℃10min，10℃保存，制得连接产物；

(4)将步骤(3)制得的连接产物进行纯化，并对纯化后的文库再次扩增，扩增体系为：纯化后的文库20μL，HiFi文库扩增缓冲液25μL，PCR引物混合液5μL；扩增反应条件为：95℃3min；98℃ 20s，60℃ 15s，72℃ 30s，8个循环；72℃ 10min，4℃保存，制得扩增文库；

(5)将步骤(4)制得的扩增文库进一步纯化，质检，并用qubit对各文库进行定量，即得。