[发明专利]一种基于二代测序的人类Y-STR检测方法及其应用在审

专利信息
申请号: 202011641239.9 申请日: 2020-12-31
公开(公告)号: CN112746096A 公开(公告)日: 2021-05-04
发明(设计)人: 张振兴;夏昊强;董晓静;娄阁;全旺 申请(专利权)人: 郑州高新生物技术有限公司
主分类号: C12Q1/6869 分类号: C12Q1/6869;C12Q1/6888;C12N15/11;G16B40/00
代理公司: 广州科沃园专利代理有限公司 44416 代理人: 张帅
地址: 450000 河南省郑州市*** 国省代码: 河南;41
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摘要:
搜索关键词: 一种 基于 二代 人类 str 检测 方法 及其 应用
【权利要求书】:

1.一种基于二代测序的人类Y-STR检测方法,其特征在于,包括如下步骤:

S1、根据中国人群STR群体遗传多态性分析结果,最终筛选获得88个Y染色体基因座,分别为DYS19、DYF371a/b/c/d、DYS385a/b、DYF387S1a/b、DYS388、DYS389-I、DYS389-II、DYS390、DYS391、DYS392、DYS393、DYF397S1a/b、DYF399S1a/b/c、DYF403S1a1/a2/b1/b2、DYF404S1a/b、DYS425a/b/c/d、DYS437、DYS438、DYS439、DYS443、DYS444、DYS446、DYS447、DYS448、DYS449、DYS456、DYS458、DYS459a/b、DYS460、DYS464a/b/c/d、DYS481、DYS485、DYS504、DYS505、DYS508、DYS510、DYS518、DYS520、DYS522、DYS526a/b、DYS527a/b、DYS531、DYS533、DYS549、DYS552、DYS557、DYS570、DYS576、DYS587、DYS593、DYS596、DYS612、DYS617、DYS622、DYS626、DYS627、DYS630、DYS635、DYS641、DYS643、DYS644、DYS645、DYS710、DYS720、DYS722、Y-GATA-A10、Y-GATA-H4;

S2、根据基因座的序列信息,设计引物,用于扩增基因座序列;

S3、根据步骤S2设计的引物构建基因文库;

S4、将步骤S3构建的基因文库进行测序,并对测序数据进行分析,即可。

2.如权利要求1所述的检测方法,其特征在于,步骤S2所述的引物及各引物在进行PCR扩增时的引物浓度如下表1所示。

表1不同基因座的引物序列及浓度

3.如权利要求1所述的检测方法,其特征在于,步骤S3所述的构建基因文库的具体过程为:

(1)多重PCR预混液的配制及PCR扩增:引物混合液10μL,多重PCR扩增缓冲液4μL,模板DNA 1~100ng,加无菌超纯水至总反应体系20μL,按下列程序进行PCR反应:95℃,3min;95℃ 15s,72℃ 90s,28个循环;72℃ 10min;4℃保存,制得PCR产物;

(2)将步骤(1)制得的PCR产物进行消化:取步骤S1制得的PCR产物20μL,向其中加入消化缓冲液2μL,按下列程序消化:50℃ 10min,55℃ 10min,60℃ 20min,10℃保存,制得消化产物;

(3)接头连接:按下列反应配制反应混合液:步骤(2)制得的消化产物22μL,连接缓冲液6μL,接头1μL,连接酶1μL,总体系为30μL,并按以下反应进行连接:22℃ 30min,72℃10min,10℃保存,制得连接产物;

(4)将步骤(3)制得的连接产物进行纯化,并对纯化后的文库再次扩增,扩增体系为:纯化后的文库20μL,HiFi文库扩增缓冲液25μL,PCR引物混合液5μL;扩增反应条件为:95℃3min;98℃ 20s,60℃ 15s,72℃ 30s,8个循环;72℃ 10min,4℃保存,制得扩增文库;

(5)将步骤(4)制得的扩增文库进一步纯化,质检,并用qubit对各文库进行定量,即得。

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