[发明专利]多肽混合物高效液相色谱分析方法

说明书

本发明涉及一种多肽混合物高效液相色谱分析方法，具体而言，该方法包括如下步骤，步骤(1)配置待测醋酸格拉替雷溶液；步骤(2)以阳离子交换液相色谱法，对待测样本进行梯度洗脱，步骤(3)检测分析共聚物各组分对应峰面积，通过与对照品比对，确定待测样本各组分含量范围是否合格。

本申请是申请号201580079194.1，申请日为2015年4月28日，发明名称为“多肽混合物高效液相色谱分析方法”的中国专利申请的分案申请。

技术领域

本发明属于生物医药领域，具体而言，涉及一种多肽混合物高效液相色谱分析方法。

背景技术

醋酸格拉替雷(Glatiramer acetate，缩写为GA)是一种人工合成多肽类混合物(相对分子量：4700-11000道尔顿)，由L-丙氨酸、L-谷氨酸、L-酪氨酸和L-赖氨酸四个氨基酸所组成的随机聚合物，长为45-100个氨基酸。各氨基酸摩尔比大约为0.392-0.462，0.129-0.153，0.086-0.100，0.300-0.374。该药物由以色列药厂梯瓦制药(TEVA)所研发制造，商品名为于1996年获美国FDA核准用于治疗多发性硬化症，目前有注射用水针和注射用冻干粉针两种产品，均用于皮下注射。

醋酸格拉替雷是一个连续性很强的共聚物，其结构如下式所示：

(Glu，Ala，Lys，Tyr)_x.xCH₃COOH

(C₅H₉NO₄.C₃H₇NO₂.C₆H₁₄N₂O₂.C₉H₁₁NO₃)x.

xC₂H₄O₂

CAS-147245-92-9

对于仿制该药厂商，只能基于该药的一些固有性质来考察仿制醋酸格拉替雷与对照制剂醋酸格拉替雷的组分差异。

本发明基于本品在不同缓冲溶液中所带电荷、极性、非极情况，采用阴离子交换色谱、阳离子交换色谱、反相色谱，进行阶梯式梯度洗脱的方式对比分析试制样品与市售商品制剂(对照品)的差异。

基于醋酸格拉替雷是一个连续性很强的共聚物，很难用一种分离方法弄清各个组分。现有的分析方法基于组分间分子量差异用体积排阻法进行简单分离分析(将单一峰分为若干组分收集后对其组分再进行分析)，可见文献方法较为繁琐。开发能有效分离醋酸格拉替雷各组分的分析方法是非常有必要的。

发明内容

本发明首先涉及一种采用高效液相色谱法对醋酸格拉替雷进行线性或阶梯式梯度洗脱，并分析该共聚物各组分含量是否合格的方法。

该方法包括如下步骤，

步骤(1)配置待测醋酸格拉替雷溶液；

步骤(2)以阴离子交换液相色谱法、阳离子交换液相色谱法或反相液色谱法，对待测样本进行梯度洗脱，

步骤(3)检测分析共聚物各组分对应峰面积，通过与对照品比对，确定待测样本各组分含量范围是否合格。

步骤(2)所述的洗脱梯度为

步骤(2)所述采用阴离子交换液相色谱法的色谱条件为：

采用羧基键合聚苯乙烯-二乙烯苯颗粒为填料的色谱柱，所述的色谱柱填料颗粒粒径为1.7-10μm；