[发明专利]一种农杆菌介导的高效玉米骨干自交系遗传转化的方法

权利要求书

1.一种农杆菌介导的高效玉米骨干自交系遗传转化的方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1，配置诱导培养基；

步骤2，选取外植体取授粉11-16天的幼雌性穗，并对其进行消毒，消毒时采用酒精浸泡8-12分钟，消毒完成后选取雌穗中部颗粒饱满大小在1.0-1.6mm的幼胚；

步骤3，将选取的幼胚接种到诱导培养基中，诱导愈伤组织，在黑暗环境培养2-6天，温度保持在23-28度之间；

步骤4，将愈伤组织与胚芽分离，然后将愈伤组织接种于农杆菌悬浮液中浸染；

步骤5，将浸染后的愈伤组织从农杆菌悬浮液中取出，利用无菌布擦拭干净，并置于无菌台面晾干；

步骤6，配置共同培养基；

步骤7，将晾干后的愈伤组织放入共同培养基中，保持温度在20-25度，光照12-14h/d，光照强度在6000-10000lx直至愈伤组织表面出现菌体即可；

步骤8，再次对愈伤组织进行清洗，清洗后将表面擦拭干净后，并置于无菌台面晾干；

步骤9，配置筛选培养基；

步骤10，将愈伤组织接种到筛选培养基中进行抗性筛选，获取抗性的愈伤组织；

步骤11，配置分化培养基；

步骤12，将抗性愈伤组织接种到分化培养基培养，直至愈伤组织生出幼苗；

步骤13，配置生根培养基；

步骤14，将幼苗接种到生根培养基上生根，获得玉米自交系转化苗。

2.根据权利要求1所述的一种农杆菌介导的高效玉米骨干自交系遗传转化的方法，其特征在于，所述步骤1中的诱导培养基成分包括，MS盐3.2～5.0g/L、蔗糖25-30g/L、琼脂粉13-18g/L、N6维生素0.8-2.2ml/L。

3.根据权利要求1所述的一种农杆菌介导的高效玉米骨干自交系遗传转化的方法，其特征在于，所述步骤6中的共同培养基成分包括，MS盐3.6～5.8g/L、琼脂粉20-30g/L、葡萄糖50-250ml/L、乙酰丁香酮100～120μmol/L、L-脯氨酸1.6～2.5g/L。

4.根据权利要求1所述的一种农杆菌介导的高效玉米骨干自交系遗传转化的方法，其特征在于，所述步骤9中的筛选培养基成分包括，6-BA0.1-0.2mg/mL、Hyg 20-25mg/L、Timentin 200-400mg/L、琼脂粉10-15g/L、葡萄糖60-300ml/L。

5.根据权利要求1所述的一种农杆菌介导的高效玉米骨干自交系遗传转化的方法，其特征在于，所述步骤11中的分化培养基成分包括，Hyg 20-25mg/L、蔗糖25-30g/L、琼脂粉10-15g/L、酪蛋白水解物0.18～0.22g/L、甘氨酸0.039～0.052g/L、双丙氨膦3.3～5.1mg/L、天冬氨酸150-250mg/L。

6.根据权利要求1所述的一种农杆菌介导的高效玉米骨干自交系遗传转化的方法，其特征在于，所述步骤13中的生根培养基成分包括，蔗渣30-60g/L、草木灰25-45g/L、河沙60-80g/L、活性炭0.5-5％、双丙氨膦3.7～4.3mg/L、蔗糖27～33g/L。

7.根据权利要求1所述的一种农杆菌介导的高效玉米骨干自交系遗传转化的方法，其特征在于，所述步骤4的浸染时间为12-30分钟。