[发明专利]一种人造新冠病毒吞噬细胞的方法

说明书

一种人造新冠病毒吞噬细胞的方法，其特征在于，以DNA重组技术将各单位产前诊断后剩余的羊水间充质干细胞改造为能向新冠病毒感染部位迁移定居、能与宿主细胞竞争将新冠病毒吸入干细胞内、能沉默新冠病毒mRNA在干细胞内转录、能在体外无限传代的兼具干细胞天然治疗功能并获得吞噬细胞趋化、吞噬和杀毒功能的人造新冠病毒吞噬细胞，使之在新冠肺炎治疗中能集中到感染部位，然后分化为既是肺组织细胞又是吞噬细胞的多功能细胞，可应用于将每位新生儿的离体干细胞改造为新冠病毒吞噬细胞，直接用于COVID‑19的防治或用于制备以人造吞噬细胞为载体的能长期稳定表达中和抗体的新冠疫苗，作为出生宝宝奉献给社会的抗新冠礼物收藏于干细胞库备用。

技术领域

本发明涉及一种人造新冠病毒吞噬细胞的方法，属于生物医学领域的传染病防治技术。

背景技术

新型冠状病毒(SARS-CoV-2)已对全球公众健康构成严重威胁，尚无特效药物。

因干细胞具有定向分化、产生细胞因子、分泌miRNA外泌体、调节免疫、抗纤维化、抑制炎性因子风暴等作用而被试用于治疗COVID-19，已初步表明对重症新冠肺炎具有较好的安全性、有效性及应用前景，但干细胞植入后的存活、定居和效应等问题限制了广泛应用。

目前用于临床治疗的干细胞，国内外主要聚焦在间充质干细胞(MSCs)和自然杀伤细胞 (NK)，其中应用最多的是MSCs。通常间充质干细胞在体外传代至15-30代就会衰老或死亡，而经猿猴病毒40大T抗原基因(SV40LT)转染的细胞系可在体外培养350代以上，并能基本保留原始细胞的分化表型和生物学特性，已广泛应用于人源性肝细胞、血管纹边缘细胞、软骨干细胞等的永生化。说明用这种基因转染技术制备的永生化干细胞，能具备永久生存、无限扩增的性能，可解决干细胞的临床用量、植入存活及收藏备用等问题。

吞噬细胞在特异性和非特异性免疫中具有很大的作用，人体的吞噬细胞通过定向迁移、识别、吞噬和杀伤等环节发挥作用。吞噬细胞在某些病原体及其产物的作用下，分泌趋化因子，向病原体入侵部位聚集和迁移，通过其表面甘露糖受体和脂多糖受体识别病原体及其产物的相应配体，并与之结合，然后通过伪足将较大病原体吞噬入胞内或通过胞膜内陷将较小病原体胞饮入胞内，最后通过吞噬细胞内的溶酶体将病原体杀死。据此，我们可以将间充质干细胞改造为具有定向迁移、识别、吞噬和杀伤功能的吞噬细胞。

文献报道，血管紧张素II(AngII)能通过AngII受体(AT2R)促进表达AT2R的干细胞迁移，而且血管紧张素II(AngII)在损伤的肺组织中呈上调。因此，如果构建AT2R过表达慢病毒载体，通过慢病毒转染将AT2R整合到干细胞DNA，构建AT2R过表达干细胞，这种AT2R 过表达干细胞在新冠肺炎的治疗中，就易于向AngII上调的损伤肺组织迁移、定居。

新型冠状病毒含有刺突蛋白(S)、膜蛋白(M)、包膜蛋白(E)和核壳蛋白(N)，其中S蛋白包括N端的S1亚基和C端的S2亚基，S1亚基由N端的结构域(S1-NTD)和受体结合域 (S1-RBD)组成，S1-RBD负责识别并结合细胞表面受体血管紧张素转换酶2(ACE2)，S2亚基介导病毒包膜和宿主细胞膜融合，使病毒通过受体ACE2进入细胞从而引起感染。因此，如果构建慢病毒载体，通过慢病毒转染将ACE2整合到干细胞DNA上表达，则新冠病毒更易通过 ACE2进入这种过表达ACE2的干细胞，这种干细胞产生了吞噬细胞吞噬病毒的功能。