[发明专利]特异性针对人类连接蛋白-2的抗体

说明书

本发明提供了以高亲和性和特异性识别人类连接蛋白‑2(连接蛋白‑2、脊髓灰质炎病毒受体相关蛋白‑2、脊髓灰质炎病毒受体样蛋白2、CD112或PRR‑2，是一种具有两个Ig样C2型结构域和一个Ig样V型结构域的单次跨膜糖蛋白)并抑制它与TIGIT和/或CD112R的结合的单克隆抗体。所述抗体识别连接蛋白‑2蛋白(CD112)、阻止它与具有Ig和ITIM结构域的T细胞免疫受体(TIGIT)和CD112R(PVRIG)的结合并抑制对淋巴细胞例如自然杀伤(NK)细胞和T‑细胞的抑制活性。本发明还提供了用于癌症免疫疗法和诊断的药物和方法。本发明最后还提供了包含与连接蛋白‑2结合的scFv抗体的嵌合抗原受体(CAR)。

技术领域

本发明属于免疫治疗领域，并涉及与人类蛋白连接蛋白-2(CD112)结合的抗体及其片段、编码这些抗体和片段的多核苷酸序列和产生它们的细胞。本发明还涉及包含这些抗体和片段的治疗和诊断组合物，以及使用它们治疗和诊断疾病、特别是癌症的方法。

背景技术

通过例如用特异性针对肿瘤细胞上的抗原的抗体治疗、使用抗原呈递细胞与肿瘤细胞的融合体治疗或通过抗肿瘤T细胞的特异性激活，癌症免疫疗法被用于产生并增强抗肿瘤免疫应答。在患者中召集针对肿瘤细胞的免疫细胞(例如T细胞)的能力，提供了一种对抗到目前为止被认为是不可治愈的癌症类型和转移瘤的治疗模式。

T细胞介导的免疫应答包括多个连续步骤，它们受到控制免疫应答强度的共刺激和共抑制信号之间的平衡的调控。被称为免疫检查点的抑制信号对于维持自我耐受和限制免疫介导的附带组织损伤来说至关重要。当感染或免疫激发被清除、恶化或持续时，这些抑制信号改变，并且这些改变影响T细胞的应答并重塑免疫应答。

免疫检查点蛋白的表达被肿瘤改变。例如，癌细胞表面上程序性死亡配体1(PD-L1)上调，允许它们与T细胞上表达的检查点分子PD-1结合。这导致原本可能攻击肿瘤细胞的T细胞的抑制，并允许所述肿瘤细胞避开宿主免疫系统。因此，免疫检查点代表了激活针对癌症的功能性细胞免疫的重要屏障。因此，特异性针对T细胞上的抑制性配体(例如PD-1)的拮抗性抗体是正被用于癌症治疗的针对免疫检查点的靶向药剂的实例(例如纳武单抗和派姆单抗)。免疫检查点分子的另一个实例是具有Ig和ITIM结构域的T细胞免疫受体(TIGIT)。TIGIT是在包括T细胞和自然杀伤细胞(NK细胞)在内的各种不同免疫细胞上表达的一种共抑制分子。TIGIT以高亲和性与脊髓灰质炎病毒受体(PVR)和连接蛋白-2结合。

也被称为脊髓灰质炎病毒受体相关蛋白-2、脊髓灰质炎病毒受体样蛋白2、CD112或PRR-2的连接蛋白-2(Nectin-2)，是一种具有两个Ig样C2型结构域和一个Ig样V型结构域的单次跨膜糖蛋白。连接蛋白-2参与介导细胞与细胞外基质分子的粘附，充当粘附连接的质膜组分之一。它还充当单纯疱疹病毒和伪狂犬病病毒的某些突变株的进入受体，并参与这些病毒的细胞间传播。该基因的变异已与多发性硬化症严重程度的差异相关联。重要的是，连接蛋白-2还可以充当T细胞信号传导的调节物。取决于它所结合的受体，它可以是T细胞功能的共刺激剂或共抑制剂。在与CD226(DNAM-1)结合后，它刺激T细胞增殖和细胞因子包括IL-2和IFNγ的产生，而在与PVRIG(CD112R)和/或TIGIT相互作用后，它抑制T细胞增殖。这两种相互矛盾的相互作用是竞争性的。

已显示连接蛋白-2在包括乳腺癌和卵巢癌在内的各种不同肿瘤中过表达(Oshima等，Molecular Cancer 2013)。连接蛋白-2在肿瘤细胞上的存在导致预后不良和T细胞活性降低(Stamm等，Oncogene 2018)。

美国专利申请号2017/0037133公开了一种针对CD112(连接蛋白-2、PVRL2)、CD155(PVR)、半乳凝素-9、TIM-3和/或TIGIT的抑制剂，用于治疗血源性癌症、特别是急性髓系白血病(AML)的方法中。所述抑制剂可以是抗体构建物。