[发明专利]乙型肝炎表面抗原的三维表位以及与其特异性结合的抗体

说明书

本发明涉及乙型肝炎表面抗原的特异性三维表位以及与其结合的乙型肝炎中和抗体。本发明提供的表位具有特定的三维结构。另外，本申请的三维表位不包含在施用常规疫苗或HBIg时可产生逃逸突变的“a”决定簇。因此，能够与本申请的三维表位结合的抗体极不可能允许由常规疫苗引起的疫苗逃逸突变的出现，并因此可维持持续的作用。因此，这样的抗体或疫苗组合物可有效地应用于预防和治疗HBV中，具有很大的经济价值。

技术领域

本发明涉及乙型肝炎表面抗原(下文中简称为HBsAg)的构象表位及与其特异性结合的抗体。

背景技术

与自发愈合的患者相比，患有慢性乙型肝炎的患者没有或有非常差的T细胞应答。已报道，这是因为由于持续暴露于过量的病毒抗原，例如乙型肝炎表面抗原(hepatitis Bsurface antigen，HBsAg)，所以对HBV具有特异性的T细胞消失或无法正确发挥作用。

对于慢性乙型肝炎患者，血液中的病毒颗粒达到10¹⁰个颗粒/ml，并且HBsAg甚至可达到100ug/ml的水平。这样的过量的病毒颗粒或HBsAg抑制了人体的免疫功能，并因此被认为是慢性肝炎的重要原因。另外，已报道，HBV颗粒或HBsAg可进入树突细胞以降低T细胞、B细胞和NK细胞的活化。另外，在使用从健康人血液中分离的树突细胞进行的实验中，观察到重组乙型肝炎表面抗原(recombinant Hepatitis B surface antigen，rHBsAg)进入树突细胞，并且这些树突细胞的活化标志物蛋白质表达降低。另外，当这些树突细胞与NK细胞和T细胞共培养时，这样的树突细胞活化细胞(例如NK细胞和T细胞)的能力也降低(WoltmanAM,PLos ONE,e15324,January 5,2011)。

这种其中发生免疫功能损失或免疫耐受诱导的现象在感染有腺相关病毒-乙型肝炎病毒(Adeno-associated virus-hepatitis B virus，AAV-HBV)的小鼠中也观察到。令人感兴趣地，在其中注射抗HBsAg单克隆抗体以降低血液中HBsAg浓度的情况下，已经显示免疫耐受现象逐渐降低以恢复B细胞和辅助T细胞的功能。

同时，已知通过常规乙型肝炎疫苗接种产生的大多数抗体识别“a”决定簇('a'determinant)，其是HBsAg的第124至147位氨基酸之间的位点。另外，已报道，虽然“a”决定簇用作HBV的主要中和表位，但在一些患者中出现的“a”决定簇内具有突变的某些突变体可逃逸由乙型肝炎疫苗接种产生的抗体。

因此，越来越需要开发用于预防和治疗乙型肝炎的新的抗体或疫苗，其可抵消针对现有疫苗或乙型肝炎免疫球蛋白(hepatitis Bimmunoglobulin，HBIg)产生的这样的逃逸突变体。特别地，为了产生和验证针对HBsAg的有效抗体，需要鉴定抗原的确切表位。

发明内容

技术问题

本发明的一个目的是提供乙型肝炎表面抗原的构象表位，以及与该表位特异性结合并对多种突变体HBsAg具有优异结合能力的抗体或其片段。

问题的解决方案

为实现上述目的，在本发明的一个方面中，提供了乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的构象表位(conformational epitope)，以及与该表位特异性结合的乙型肝炎病毒中和抗体或其片段。

有益效果

本文中提供的乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的构象表位包含对与乙型肝炎病毒中和抗体特异性结合而言重要的所有关键残基，并且维持允许表位对乙型肝炎病毒中和抗体显示出高亲和力的适当的三维结构。因此，本发明的表位基于其高免疫原性可用作优良的HBV疫苗组合物。另外，通过使用本发明的表位产生的HBV中和抗体可有效地清除血液中存在的HBsAg，并且在感染有乙型肝炎病毒的个体中诱导免疫力的恢复，从而有效地治疗乙型肝炎。另外，该抗体可与多种HBsAg变体有效地结合，从而有效地消除乙型肝炎病毒。