[发明专利]用于基于LC-MS的HbA1c测量的高速样品工作流程

权利要求书

1.一种用于测定样品中糖化血红蛋白A(HbA1c)的方法，其包括：

(a)提供包含血红蛋白A(HbA)分子的样品，

(b)对来自步骤(a)的所述样品进行部分蛋白水解消化步骤，其中产生血红蛋白Aβ链分子的N末端片段，

(c)任选地富集在步骤(b)中产生的所述血红蛋白Aβ链分子的N末端片段，以及

(d)通过质谱(MS)对包含血红蛋白Aβ链分子的N末端片段的样品进行分析，其中测定所述样品中HbA1c的量或浓度。

2.根据权利要求1所述的方法，其中步骤(a)中的所述样品为溶血的全血样品，特别是溶血的人全血样品。

3.根据权利要求1-2中任一项所述的方法，其中在所述部分蛋白水解消化步骤(b)中，基于所述样品中最初存在的HbAβ链分子的总量，约1％至约20％，特别是约5％至10％的存在于所述样品中的所述HbAβ链分子被消化。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中步骤(b)中的所述部分蛋白水解消化用蛋白水解酶进行，所述蛋白水解酶产生血红蛋白Aβ链分子的N末端片段，其长度在4-20个氨基酸的范围内，特别是在5-15个氨基酸的范围内，并且更特别地，其中所述蛋白水解酶根据SEQ ID NO：1在第6、8或14位氨基酸之后切割血红蛋白Aβ链分子。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其中步骤(b)中的所述部分蛋白水解消化用内肽酶，特别是用选自由Glu-C、胰蛋白酶、胃蛋白酶和嗜热菌蛋白酶组成的组的内肽酶进行。

6.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其中步骤(b)中的所述部分蛋白水解消化进行短于约60min，特别是短于约45min，或短于30min的时间段。

7.根据权利要求1-6中任一项所述的方法，其中步骤(b)中的所述蛋白水解消化用所述内肽酶Glu-C进行，特别是在约37℃的温度，在包含铵离子的缓冲液中，以约0.6mg/mL的浓度进行约15min至约45min的时间段，并且通过添加甲酸水溶液，特别是添加0.1％(v/v)的甲酸水溶液来停止所述消化。

8.根据权利要求1-7中任一项所述的方法，其中在富集步骤(c)中，通过从固相中选择性洗脱，特别是在约5％-20％(v/v)乙腈的存在下，更特别是在约10％(v/v)乙腈的存在下来富集血红蛋白Aβ链分子的N末端片段。

9.根据权利要求1-8中任一项所述的方法，其中步骤(d)包括MS/MS分析，特别是血红蛋白Aβ链分子的N末端片段的MS/MS分析。

10.根据权利要求1-9中任一项所述的方法，其中测定糖化血红蛋白A(HbA1c)与非糖化血红蛋白A(HbA0)或与总血红蛋白A(HbA)的比率。

11.一种试剂盒，其包含：

(i)用于HbAβ链分子的部分蛋白水解消化的酶和任选地用于所述酶的消化缓冲液，

(ii)能够停止用(i)的所述酶进行的蛋白水解消化的停止介质，和

(iii)任选地用于富集蛋白水解消化的HbA1c分子的富集装置，和

(iv)任选地用于从(iii)的所述富集装置中洗脱样品组分的包含有机水混溶性溶剂的洗脱介质。

12.根据权利要求11所述的试剂盒在根据权利要求1-10中任一项所述的方法中的用途。

13.一种用于测定样品中糖化血红蛋白A(HbAc1)的诊断系统，所述诊断系统适用于执行根据权利要求1-10中任一项所述的方法。