[发明专利]重组蛋白的制备方法

说明书

本发明涉及一种重组蛋白的制备方法，其具备：增殖降低工序，其用于降低表达重组蛋白的重组细胞的细胞增殖；以及生产工序，其用于在降低细胞增殖的状态下，在蛋白质生产培养基中培养重组细胞以生产重组蛋白；其中，在增殖降低工序中，通过使用包含至少一个改造后的形态形成控制因子在内的重组细胞作为重组细胞，来降低重组细胞的细胞增殖。

技术领域

本发明涉及一种重组蛋白的制备方法。本发明还涉及一种增加每个细胞的重组蛋白生产量的方法。

背景技术

已知在使用了重组细胞生产重组蛋白中，细胞增殖的富集度未必与重组蛋白的生产能力有关。例如，在专利文献1中，公开了一种方法，其特征在于降低了所述诱导表达后的菌体增殖，具体是一种丝心蛋白样蛋白质的制备方法，其包括：在培养基中培养具有编码丝心蛋白样蛋白质的基因的大肠杆菌；诱导编码丝心蛋白样蛋白质的基因的表达；以及采集丝心蛋白样蛋白质。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：国际公开第2015/178466号

发明内容

发明所要解决的问题

本发明的目的在于提供一种重组蛋白的制备方法，其在降低重组细胞的细胞增殖的同时，提高重组蛋白的生产能力。

用于解决问题的方法

本发明人等发现，在重组蛋白的制备中，通过使用具有改造后的形态形成控制因子的细胞作为宿主，可以在降低重组细胞的细胞增殖的同时，提高每个细胞的重组蛋白的生产量。本发明基于该新的见解而完成。

本发明涉及例如下述各发明。

[1]一种重组蛋白的制备方法，其具备：增殖降低工序，其用于降低表达重组蛋白的重组细胞的细胞增殖；以及生产工序，其用于在降低细胞增殖的状态下，在蛋白质生产培养基中培养上述重组细胞以生产上述重组蛋白；其中，在上述增殖降低工序中，通过使用包含至少一个改造后的形态形成控制因子在内的重组细胞作为上述重组细胞，来降低上述重组细胞的细胞增殖。

[2]根据[1]所述的制备方法，其中，上述改造后的形态形成控制因子是突变型细胞骨架蛋白。

[3]根据[2]所述的制备方法，其中，上述突变型细胞骨架蛋白是突变型MreB。

[4]根据[3]所述的制备方法，其中，上述突变型形态形成控制因子包含与MreB具有至少90％的序列一致性的氨基酸序列。

[5]根据[3]或[4]所述的制备方法，其中，上述突变型形态形成控制因子在MreB的第53个氨基酸残基丙氨酸中具有突变。

[6]根据[3]～[5]中任一项所述的制备方法，其中，上述突变型形态形成控制因子具有MreB的第53个氨基酸残基丙氨酸被苏氨酸取代的突变。

[7]根据[1]所述的制备方法，其中，上述重组细胞是导入了用于控制细胞骨架蛋白功能的蛋白质的表达盒的细胞。

[8]根据[7]所述的制备方法，其中，控制上述细胞骨架蛋白功能的蛋白质为sulA。

[9]根据[1]～[8]中任一项所述的制备方法，其中，上述蛋白质生产培养基包含天然来源成分。

[10]根据[1]～[9]中任一项所述的制备方法，其中，上述重组蛋白的疏水性为-1.0以上。

[11]根据[1]～[10]中任一项所述的制备方法，其中，上述重组蛋白为结构蛋白质。

[12]根据[1]～[11]中任一项所述的制备方法，其中，上述重组蛋白为丝心蛋白。

[13]根据[1]～[12]中任一项所述的制备方法，其中，上述重组蛋白为蜘蛛丝丝心蛋白。