[发明专利]病毒生产方法

权利要求书

1.一种在生物反应器中生产病毒的方法，其包括以下步骤:

a)在生物反应器中提供宿主细胞；

b)使宿主细胞在恒定的初始dO₂水平、pH和温度下生长；

c)将dO₂降低至初始氧水平的20-90％；

d)在步骤c)之后2-24小时用至少一种病毒或病毒颗粒感染宿主细胞；

e)培养被所述病毒或病毒颗粒感染的所述宿主细胞以繁殖所述病毒；和

e)收获病毒。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述宿主细胞是贴壁细胞。

3.根据权利要求1至2所述的方法，其中所述生物反应器是平床生物反应器。

4.根据权利要求1至3所述的方法，其中固定床的高度为2cm至10cm。

5.根据权利要求1至4所述的方法，其中所述生物反应器是一次性平床生物反应器。

6.根据权利要求1至5所述的方法，其中步骤c中的所述dO₂水平降低至20-50％。

7.根据权利要求1至6所述的方法，其中当电导率为60mS/cm至80mS/cm时，步骤c中的所述dO₂水平降低。

8.根据权利要求1至7所述的方法，其中当电导率为90mS/cm至110mS/cm时，步骤d中的宿主细胞被病毒感染。

9.根据权利要求1至8所述的方法，其中病毒感染宿主细胞的感染复数(MOI)为约0.1至0.05。

10.根据权利要求1至9所述的方法，其中病毒感染宿主细胞的MOI为0.05。

11.根据权利要求1至10所述的方法，其中步骤c中的dO₂在步骤d中感染宿主细胞前12至24小时降低。

12.根据权利要求1至11所述的方法，其中所述病毒选自VSV、腺病毒、流感病毒、罗斯河病毒、甲型肝炎病毒、痘苗病毒和重组痘苗病毒、单纯疱疹病毒、日本脑炎病毒、单纯疱疹病毒、西尼罗病毒、黄热病毒，及其嵌合体，以及鼻病毒和呼肠孤病毒。

13.根据权利要求1至12所述的方法，其中所述病毒是病毒载体。

14.根据权利要求1至13所述的方法，其中所述病毒是VSV载体。

15.根据权利要求1至14所述的方法，其中所述宿主细胞选自Vero细胞、MBCK细胞、MDBK细胞、MRC-5细胞、BSC-1细胞、LLC-MK细胞、CV-1细胞、CHO细胞、COS细胞、鼠细胞、人细胞、鸟细胞、昆虫细胞、HeLa细胞、293细胞、MDOK细胞、CRFK细胞、RAF细胞、TCMK细胞、LLC-PK细胞、PK 15细胞、W1-38细胞、T-FLY细胞、BHK细胞、SP2/0细胞、NS0细胞和PerC6细胞。

16.根据权利要求1至15所述的方法，其中所述宿主细胞是Vero细胞。

17.根据权利要求1至16所述的方法，其还包括通过噬菌斑测定法测定病毒效价的步骤。

18.根据权利要求1至17所述的方法，其还包括纯化和/或表征所述病毒的步骤。

19.根据权利要求1至18所述的方法，其还包括用所述病毒生产疫苗的步骤。