[发明专利]病毒生产方法

说明书

本发明涉及一种通过特异性修饰培养基中的溶解氧水平来增加固定床生物反应器中来自宿主细胞的病毒、病毒颗粒或病毒载体的产量的方法。

相关申请的交叉引用

本申请要求于2019年2月15日提交的美国临时申请号62/806,277的权益，其通过引用的方式全文纳入本文。

技术领域

本发明涉及用于疫苗和病毒载体生产的病毒和病毒载体的繁殖方法。更具体地，本发明涉及增加固定床生物反应器中来自宿主细胞的病毒产量的特定方法。

背景技术

允许快速生产病毒和病毒载体以满足对疫苗和其他疗法不断增长的需求的强大的技术至关重要。此外，对于多功能宿主细胞技术平台，例如Vero细胞和其他哺乳动物细胞平台、鸟类细胞平台和昆虫细胞技术平台的开发，提高宿主细胞病毒产量的技术也在加快疫苗工艺和生产的发展中发挥着重要作用。本发明满足了改进病毒产生方法的需要。

发明内容

本发明提供了一种提高病毒产量的方法。在一个实施方案中，公开了在生物反应器中生产病毒的方法。该方法包括以下步骤:1)在生物反应器中，在参数如溶解氧(dO₂)、pH和温度可以控制的环境中，提供宿主细胞，2)在恒定的初始100％ dO₂、7.4 pH和37℃温度下生长细胞，3)将dO₂水平降低至初始dO₂水平的20-50％，同时保持pH和温度恒定，4)在降低dO₂之后8-24小时用至少一种病毒感染细胞，在20-50％的dO₂水平、7.4的pH和37℃温度下培养带有病毒的宿主细胞，和5)收获病毒。在实施方案中，宿主细胞是贴壁细胞，其是贴壁依赖性的并且需要微载体和/或固定床来固定。在优选的实施方案中，将Vero细胞用作固定床生物反应器中的宿主细胞。

在本发明的优选实施方案中，在用病毒感染宿主细胞前12小时，dO₂至少降低50％。在优选的实施方案中，在宿主细胞生长到最高细胞密度后，用病毒感染宿主细胞。在本发明的另一个实施方案中，在宿主细胞达到最高细胞密度后降低dO₂。

附图说明

图1A示出了在固定床生物反应器中使用的微载体条带，在5mL培养基中显示了13条微载体条带，每条带约11.2cm²三维面积。

图1B示出了生物反应器的横截面，该生物反应器可用于容纳每床多达3,500个条带。

图1C以横截面视图示出了生物反应器的不同部分。

图2是dO₂、pH、温度和生物量参数的图示。将dO₂、pH和温度设为常数，当与生物量探针(测量细胞生长的增加)相关的电导率达到55mS/cm时发生感染。

图3是dO₂、pH、温度和生物量参数的图示。将pH和温度设为常数，而dO₂在感染前12小时降低至45-50％，并在整个感染过程中保持恒定。感染时，与生物量探针相关的电导率达到80mS/cm。

图4是dO₂、pH、温度和生物量参数的图示。将dO₂、pH和温度设为常数。感染时，与生物量探针相关的电导率达到110mS/cm。

具体实施方式

本发明提供了增加生物反应器中病毒产量的方法。

以下内容适用于本申请的具体实施方式部分。