[发明专利]用于对样品中，尤其血液样品中的细胞类型或细胞标志物进行计数的方法

权利要求书

1.用于检测样品中特定特征细胞的方法，其包括以下步骤：

a) 提供细胞悬液1的样品

b) 对样品(1)进行第一裂解过程(2)，以使得产生样品(1)的第一裂解物(4)，其中所述裂解如此进行，以使得细胞悬液1的细胞的细胞核保持完好；

c) 提取在第一裂解物(4)中游离可得的核糖核酸(RNA)；

d) 将提取的核糖核酸归类，以确定在样品的裂解物中不同类型的核糖核酸的数量；

e) 对剩余的样品(1)进行第二裂解过程(3)，以使得产生样品(1)的第二裂解物(5)，其中如此进行裂解，以使得样品(1)中的细胞的细胞核被破坏，

f) 提取在第二裂解物(5)中游离可得的脱氧核糖核酸(DNA)，

g) 根据脱氧核糖核酸的数量来计算样品中细胞的总细胞数

h) 根据在步骤d)中确定的不同类型的核糖核酸的数量和在步骤g)中计算的总细胞数来计算样品中具有各种细胞标志物的细胞的数量。

2.根据权利要求1的方法，其中在步骤h)中的细胞标志物用于根据细胞标志物来识别CTC (循环肿瘤细胞)。

3.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中在步骤h)中的细胞标志物包括以下标志物中的至少一种：

- 上皮标志物；

- EpCAM；

- CD45；和

- 细胞角蛋白。

4.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中在步骤h)中建立血像。

5.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中至少在两个步骤g)和h)之一中考虑样品中细胞的细胞尺寸的变异性。

6.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中在步骤h)之前进行以下步骤：

g2) 区分活性核糖核酸和非活性核糖核酸。

7.根据权利要求3所述的方法，其中通过将在步骤d)中确定的数量与数据矩阵进行比较来进行步骤g)中的估算，在所述数据矩阵中为每种细胞标志物储存了关于存在的核糖核酸的数据。

8.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中在步骤c)之前进行以下步骤：

b2) 提取细胞质。

9.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中为了在步骤d)中确定所述数量，将核糖核酸转化成脱氧核糖核酸。

10.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中通过改变样品中的渗透平衡来进行步骤b)中的裂解，由此引起细胞的细胞膜的破裂。

11.根据权利要求10所述的方法，其中调节步骤b)中的渗透平衡，以使得样品中细胞的细胞核保持完好。