[发明专利]用于预测胞外囊泡(EV)的促血管生成潜力的方法

权利要求书

1.预测胞外囊泡(EV)组合物是否具有促血管生成活性的方法，其包括以下步骤：

(a)量化所述EV组合物中的miR-130a微RNA含量，以及

(b)量化所述EV组合物中的转化生长因子β(TGFβ)含量；

(c)确定miR-130a含量是否高于第一预定值以及TGFβ含量是否高于第二预定值，

其中：

当所述miR-130a含量高于所述第一预定值并且所述TGFβ含量高于所述第二预定值时，则预测所述EV组合物为具有促血管生成活性。

2.根据权利要求1所述的方法，其中通过实时聚合酶链反应(实时PCR)将所述miR-130a含量量化为Ct值，并且其中所述miR-130a含量与所述Ct值之间存在负相关。

3.根据权利要求2所述的方法，其中所述第一预定值是＜30的Ct值。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述TGFβ含量通过免疫测定，优选地通过酶联免疫吸附测定(ELISA)来测量。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中所述第二预定值是23pg/10¹⁰EV的TGFβ量。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其还包括通过效力测试来量化所述EV组合物的促血管生成活性的步骤(d)，其包括以下步骤：

-通过BrdU细胞增殖测定测试所述EV组合物以获得组合物值；

-通过BrdU细胞增殖测定测试阴性对照以获得阴性对照值；

-通过BrdU细胞增殖测定测试阳性对照以获得阳性对照值；

-通过应用以下公式计算所述BrdU细胞增殖测定中所述EV组合物的％促血管生成活性：

7.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其还包括通过效力测试来量化所述EV组合物的促血管生成活性的步骤(d)，其包括以下步骤：

-通过管生成测定测试所述EV组合物以获得组合物值；

-通过管生成测定测试阴性对照以获得阴性对照值；

-通过管生成测定测试阳性对照以获得阳性对照值；

-通过应用以下公式计算所述管生成测定中所述EV组合物的％促血管生成活性：

8.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其还包括通过包括根据权利要求6所述的BrdU细胞增殖测定和根据权利要求7所述的管生成体外测定二者的效力测试来量化所述EV组合物的促血管生成活性的步骤(d)。

9.根据权利要求1至8中任一项所述的方法，其中所述EV组合物被确定为具有至少50％的促血管生成活性。

10.根据权利要求1至9中任一项所述的方法，其中所述EV来自人细胞。

11.制备促血管生成胞外囊泡(EV)的制备物的方法，其包括以下步骤：

-从体液的多种制备物中或从细胞培养物的条件培养基中分离EV；

-以预定的EV浓度从所分离的EV制备一个或更多个样品；

-用根据权利要求1至10中任一项所述的方法预测每个EV样品的促血管生成活性；

-选择其中miR-130a含量高于所述第一预定值并且TGFβ高于所述第二预定值的样品；以及任选地

-合并两个或更多个活性EV样品，

从而获得促血管生成EV的制备物。

12.根据权利要求11所述的方法，其中通过实时PCR将所述miR-130a含量量化为Ct值并且所述第一预定值是＜30的Ct值。

13.根据权利要求11或12所述的方法，其中所述第二预定值是23pg/10¹⁰EV的TGFβ量。