[发明专利]用于预测胞外囊泡(EV)的促血管生成潜力的方法在审
申请号: | 202080021024.9 | 申请日: | 2020-03-13 |
公开(公告)号: | CN113574179A | 公开(公告)日: | 2021-10-29 |
发明(设计)人: | 马里亚·费利切·布里齐;乔瓦尼·卡穆西;克劳迪亚·卡瓦拉里 | 申请(专利权)人: | 联合细胞EV股份公司 |
主分类号: | C12Q1/6851 | 分类号: | C12Q1/6851;C12Q1/6888;G01N33/68;G01N33/58;G01N33/543;C12N5/078;A61K35/12;A61K35/14;A61K35/16;A61P9/04;A61P9/14;A61P9/10;A61P3/04;A61P3/10 |
代理公司: | 北京集佳知识产权代理有限公司 11227 | 代理人: | 张福誉;韩晓帆 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 用于 预测 胞外囊泡 ev 血管 生成 潜力 方法 | ||
本发明涉及用于预测胞外囊泡(EV),优选血液来源的EV的制备物的促血管生成活性的体外方法,其中所述方法基于对转化生长因子β(TGFβ)和微RNA‑130a含量的组合测定。还公开了制备预测具有强促血管生成活性的胞外囊泡(EV)制备物的方法及其EV制备物,其对于缺血性疾病、缺血性损伤和与心血管疾病风险相关的病理状况的治疗性治疗是有效的,或有效地用于伤口愈合。
本发明涉及预测胞外囊泡(extracellular vesicle,EV)制备物的促血管生成活性的方法、其EV制备物及其治疗性应用。
胞外囊泡(EV)是在正常和病理状况两种情况下从几乎所有细胞类型脱落的小囊泡。它们主要包括由细胞质膜出芽产生的微囊泡和通过胞吐作用来源于内体膜区室的外排体。最近的证据表明,EV可充当多种病理生理过程的介质。循环EV水平的提高与血管损伤和高凝性(hypercoagulability)有关,特别是在患有糖尿病和急性冠脉综合征的患者中,表明其在驱动心血管疾病中发挥作用。此外,主要源自血小板和内皮细胞的循环EV水平提高被认为是细胞功能障碍的标志。已广泛报道了EV充当生物活性载体,并参与循环细胞和包括内皮细胞在内的许多细胞类型之间的信息交换。事实上,也提出了源自血小板的EV在动脉粥样硬化的发病机制中发挥作用。
EV主要通过递送蛋白质、活性脂质和胞外RNA来充当生物中介物,通常被称为EV载物(cargo)(Pathan M.,et al.Vesiclepedia 2019:acompendium of RNA,proteins,lipids and metabolites in extracellular vesicles.(2019)Nucleic Acids Res.47:D516-D519)然而,研究最多的EV介导的生物过程依赖于miR转移。miR是在转录之后调节基因表达的一类非编码小RNA。miR在血清/血浆中稳定表达,并且它们独特的表达模式已被提议用作许多临床环境中的疾病指纹。此外,已经表明活化的血小板可以使用EV将功能性miR转移到血管细胞中。这进而调节ICAM-1表达和血管炎性响应。事实上,循环EV载物的变化已显示与糖尿病中的内皮细胞和平滑肌细胞的功能障碍有关。
越来越多的证据表明,EV可充当潜在的治疗、诊断和预后工具。
心血管事件风险提高是患有糖尿病和肥胖症的患者的一个共同特征。在这些临床环境中,受损的血管形成仍然被认为是导致异常血管重塑的一种相关机制。因此,促进受损组织的新生血管形成仍然是改善患者结局所必需的。已经提出了不同的治疗方法来改善具有心血管风险因素的患者的血管重塑。然而,它们未能提供真正的益处,表明仍然需要新的治疗选项。
WO2018069408公开了以强促血管生成活性为特征的血液来源的EV的组合物。此外,WO2018069408教导了一种能够测量EV的促血管生成潜力的测试,其包括测定EV诱导细胞增殖和/或在体外管状结构形成的能力。
本发明基于以下发现:EV载物的组合物代表了关于这些囊泡是否表现出促血管生成活性的一个可靠预测指标。出乎意料的是,本发明人进行的实验研究(在下面的实验部分详细说明)揭示,基于与miR-130a的测量值组合使用的转化生长因子β(TGFβ)的浓度,具有促血管生成活性的EV可与无活性囊泡区分开。事实上,如从ROC分析推导出的,基于上述测量值的组合的测试在灵敏性和特异性两个方面均表现出对EV促血管生成活性的强大预测能力,从而能够准确选择在受促血管生成治疗积极影响的疾病或损伤的治疗性治疗中有效的EV。
因此,本发明的第一方面是预测胞外囊泡(EV)组合物是否具有促血管生成活性的方法,其包括以下步骤:
(a)量化EV组合物中的miR-130a微RNA含量,以及
(b)量化所述EV组合物中的转化生长因子β(TGFβ)含量;
(c)确定miR-130a含量是否高于第一预定值以及TGFβ含量是否高于第二预定值,
其中:
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