[发明专利]用于治疗囊性纤维化的组合物和方法

说明书

本发明涉及一种用于治疗囊性纤维化(CF)的方法，所述方法使用能诱导囊性纤维化跨膜传导调节因子(CFTR)前体mRNA的外显子23、外显子24或二者的跳读的剪接调节剂，诸如反义寡核苷酸。还提供了包含剪接调节剂的组合物和药盒及其产生方法。

相关申请的交叉引用

本申请要求2019年3月28日提交的题为“COMPOSITIONS AND METHODS FORTREATING CYSTIC FIBROSIS”的美国临时专利申请第62/825,242号的优先权的权益，该申请的内容通过引用以其整体并入本文。

发明领域

本发明属于反义寡核苷酸和反义寡核苷酸的治疗用途的领域。

背景

囊性纤维化(CF)是常见的由CFTR基因突变引起的严重常染色体隐性疾病。CFTR基因编码负责上皮细胞中氯离子运输的氯离子通道。CF的主要表现在肺部，多于90％的死亡率与呼吸系统疾病相关。呼吸道疾病与气道上皮的CFTR功能不足相关。

截至今天，全世界已经鉴定了大约2000个不同的破坏CFTR功能的突变，根据它们对CFTR功能的作用分组为五种不同的类别。类别I包括导致非功能性CFTR的突变(大的缺失和终止密码子突变)。类别II突变(包括常见的ΔF508)导致CFTR蛋白被细胞质量控制机制识别并随后降解的异常折叠，导致顶端细胞膜处缺乏成熟的CFTR蛋白。类别III突变导致全长CFTR蛋白被掺入到细胞膜中，但具有有缺陷的调控，使得CFTR功能不存在。这三种类别通常导致经典CF表型伴随胰腺功能不全，尽管肺部疾病的严重程度差异很大。导致缺陷的氯化物电导的CFTR突变被分组为类别IV。类别V突变涉及转录失调，导致其他方面正常的CFTR的量减少。后两种类别通常与较温和的表型和胰腺功能充足(pancreatic sufficiency)相关。具体地，由类别IV突变产生的CFTR插入质膜，但由于氯离子渗透和开放通道概率降低，表现出降低的单通道氯离子电导。

近年来，分子和细胞生物学的基础知识有助于开发针对特定CF突变/突变类别的疗法。目前批准的疗法包括校正CFTR蛋白加工中的缺陷(校正剂：VX-809/鲁马卡托(Lumacaftor)、VX-661/替扎卡托(Tezacaftor)和VX-445/elexacaftor)，氯通道功能(增效剂：VX-770/Kalydeco)和二者的组合。然而，对于携带对可用疗法没有响应的其他突变(诸如终止突变、错义突变等)的患者，不存在可用的疗法。

反义寡核苷酸(AO或ASO)施用是用于治疗遗传紊乱最有前途的治疗方法之一。AO是短的合成分子，可以与预测参与前体mRNA剪接的基序退火。该方法基于剪接交换。期望与选择的位点结合的AO掩蔽靶区，并且促进正常剪接或实现选择的外显子的特异性排除或包含。AO对其靶是高度特异性的，并且不影响细胞中的任何其他序列。通常使用若干类型的化学修饰的AO分子，包括：2’-O-甲基-硫代磷酸酯(2OMP)、磷酸二酰胺吗啉寡聚物(PMO)、肽核酸(PNA)、2-甲氧基乙基硫代磷酸酯(MOE)、约束乙基(cET)、配体缀合反义(LICA)和交替锁核酸(LNA)。

AO修饰维持了它们的稳定，改善了它们的靶亲和力，并且提供了良好的药代动力学特性和生物稳定性。ASO作为治疗剂的潜力在若干人类遗传疾病中得到了证明。其中之一是脊髓性肌萎缩症(SMA)，其中运动神经元存活2(survival motor neuron 2，SMN2)基因中包含外显子7导致了完全功能性蛋白。基于对患有严重SMA的新生小鼠幼崽的研究中的有希望的结果，由Bieng和Ionis开发的基于ASO的药物(nusinersen)获得了FDA的批准，该批准是基于患有婴儿期发作的SMA的患者的3期临床试验的成功完成，这显示SMA婴儿的运动功能里程碑中的显著改善。

概述