[发明专利](1R,3R)-3-(三氟甲基)环己烷-1-醇及其中间体的生产方法

权利要求书

1.一种由式(3)表示的化合物的生产方法，

所述方法包括将碳-碳双键还原酶、具有产生所述酶的能力的微生物或细胞、所述微生物或细胞的加工产物和/或通过培养所述微生物或细胞获得的含有所述酶的培养液和羰基还原酶、具有产生所述酶的能力的微生物或细胞、所述微生物或细胞的加工产物和/或通过培养所述微生物或细胞获得的含有所述酶的培养液与由式(1)表示的化合物相接触，

以获得所述由式(3)表示的化合物。

2.根据权利要求1所述的生产方法，其中所述碳-碳双键还原酶包含下述(A)、(B)或(C)中示出的蛋白质：

(A)具有SEQ ID NO：1中示出的氨基酸序列的蛋白质；

(B)具有由在SEQ ID NO：1中示出的氨基酸序列中缺失、替换、插入和/或添加一个至多个氨基酸而得到的氨基酸序列，并具有催化式(I)和/或式(II)中示出的反应的活性的蛋白质：

(C)具有与SEQ ID NO：1中示出的氨基酸序列具有不低于80％同一性的氨基酸序列，其中引入有选自下述组(i)-(ii)的至少一个氨基酸替换，并具有催化式(I)和/或式(II)中示出的反应的活性的蛋白质：

(i)将SEQ ID NO：1中示出的氨基酸序列中第26位的半胱氨酸用天冬氨酸、苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸之外的氨基酸替换，

(ii)将SEQ ID NO：1中示出的氨基酸序列中第104位的丙氨酸用丙氨酸之外的氨基酸替换。

3.根据权利要求2所述的生产方法，其中所述(i)中的氨基酸替换是下述(i’)：

(i’)将SEQ ID NO：1中示出的氨基酸序列中第26位的半胱氨酸用丙氨酸替换。

4.根据权利要求2或3所述的生产方法，其中所述(ii)中的氨基酸替换是下述(ii’)：

(ii’)将SEQ ID NO：1中示出的氨基酸序列中第104位的丙氨酸用组氨酸、苯丙氨酸、色氨酸或酪氨酸替换。

5.根据权利要求1或2所述的生产方法，其中所述羰基还原酶包含下述(A)、(B)或(C)中示出的蛋白质：

(A)具有SEQ ID NO：2、3或4中示出的氨基酸序列的蛋白质；

(B)具有由在SEQ ID NO：2、3或4中示出的氨基酸序列中缺失、替换、插入和/或添加一个至多个氨基酸而得到的氨基酸序列，并具有催化式(III)和/或式(IV)中示出的反应的活性的蛋白质：

(C)具有与SEQ ID NO：2、3或4中示出的氨基酸序列具有不低于80％同一性的氨基酸序列，并具有催化式(III)和/或式(IV)中示出的反应的活性的蛋白质。

6.根据权利要求1至5中的任一项所述的生产方法，其中将所述碳-碳双键还原酶、具有产生所述酶的能力的微生物或细胞、所述微生物或细胞的加工产物和/或通过培养所述微生物或细胞获得的含有所述酶的培养液与所述由式(1)表示的化合物相接触，

以获得由式(2)表示的化合物

并且另外

将所述羰基还原酶、具有产生所述酶的能力的微生物或细胞、所述微生物或细胞的加工产物和/或通过培养所述微生物或细胞获得的含有所述酶的培养液与所述由式(2)表示的化合物相接触，以获得所述由式(3)表示的化合物

7.根据权利要求1至5中的任一项所述的生产方法，其中将所述羰基还原酶、具有产生所述酶的能力的微生物或细胞、所述微生物或细胞的加工产物和/或通过培养所述微生物或细胞获得的含有所述酶的培养液与所述由式(1)表示的化合物相接触，

以获得由式(4)表示的化合物

并且另外

将碳-碳双键还原酶、具有产生所述酶的能力的微生物或细胞、所述微生物或细胞的加工产物和/或通过培养所述微生物或细胞获得的含有所述酶的培养液与所述由式(4)表示的化合物相接触，以获得所述由式(3)表示的化合物