[发明专利]用于基因疗法的双亮氨酸拉链激酶抑制剂

说明书

本公开提供了可用于治疗与双亮氨酸拉链(DLK)相关的病状，例如包括视神经病变的神经退行性病症的组合物和方法。本公开提供了调节双亮氨酸拉链激酶(DLK)或亮氨酸拉链激酶(LZK)的活性的基因构建体和载体。本公开还提供了抑制DLK的激酶和/或信号传导活性的显性负DLK(DN‑DLK)蛋白质。本公开还提供了载体、药物组合物和抑制DLK的方法。

发明领域

本公开大体上涉及使用双亮氨酸拉链激酶的工程化抑制剂的细胞或基因疗法，包括用于神经退行性病症，诸如青光眼。

相关申请

本申请要求2019年2月15日提交的美国临时专利申请号62/806,213和2019年2月15日提交的美国临时专利申请号62/806,210的优先权，其中每一个以引用的方式整体并入本文中。

背景技术

双亮氨酸拉链激酶(DLK)是人类中由DLK基因编码的丝氨酸/苏氨酸蛋白质激酶家族的成员，也称为有丝分裂原活化的蛋白质激酶12或MAP3K12。这种激酶含有亮氨酸-拉链结构域，并且主要在神经元细胞中表达。显示这种激酶在突触末端中的磷酸化状态通过膜去极化经由钙调磷酸酶(calcineurin)进行调节。这种激酶形成同二聚体，以及具有含有转录因子的亮氨酸拉链的异二聚体，诸如cAMP反应性元件结合蛋白(CREB)和MYC，并且因此可在PKA或视网膜酸诱导的神经元分化中发挥调节作用。或者，已描述了编码不同蛋白质的剪接的转录变体。在激酶结果的活性位点中具有K152A点突变的DLK的表达对内源性DLK具有显性负效应。Xu等人Mol Cell Biol.21(14):4713-24(2001)。

DLK已被证明是对轴突损伤的神经元反应的必要组分。DLK蛋白存在于轴突中，并且蛋白质水平响应于轴突损伤而增加(Xiong X等人J.Cell Biol,2010；191(1):211–223)。DLK启动了将凋亡和再生反应与轴突损伤联合的转录程序(Watkins等人,Proc Natl AcadSci,2013；110(10):4039-4044)。

视神经病变是与神经元细胞死亡，特别是称为视网膜神经节细胞(RGC)的投射神经元的死亡相关的一组视觉疾病。在视神经病变中，美国每年花费19亿美元来治疗青光眼。

因此，对于用于治疗与DLK相关的疾病或病症的组合物和方法，以及对于用于青光眼的细胞或基因疗法的组合物和方法，存在长期未满足的需求。本公开提供了此类新型组合物和方法来处理和解决这种需求。

发明内容

本公开提供了DLK抑制剂的各种实施方案，例如，通过与内源性DLK(称为显性负双亮氨酸拉链激酶(DN-DLK))形成非活性异二聚体而以显性负方式起作用的DLK抑制剂。

在一个方面，本公开提供了可用于治疗与DLK和视网膜细胞相关的疾病或病症的组合物和方法。具体地讲，本公开提供了用于递送DN-DLK的载体(包括病毒载体)、在治疗中使用此类载体的方法以及抑制细胞中的DLK活性的方法。

在一些实施方案中，本公开提供了抑制剂，其包含使用全长人DLK(SEQ ID NO:1)的编号的在位置391和393中的至少一个处具有取代的与DLK(SEQ ID NO:3)的亮氨酸拉链结构域至少95％相同的序列。

本公开还提供了重组病毒载体，包括重组腺相关病毒(rAAV)载体，其包含多核苷酸序列编码本公开的抑制剂中的一种的表达盒。