[发明专利]宿主细胞蛋白质的鉴定

说明书

提供了鉴定样品基质中宿主细胞蛋白质的方法。所述方法包括：将所述宿主细胞蛋白质从所关注蛋白质解离；使用分子量截止过滤器过滤解离的宿主细胞蛋白质；及鉴定所述宿主细胞蛋白质，优选利用质谱进行。

技术领域

本发明大体上涉及鉴定宿主细胞蛋白质的方法。

背景技术

基于蛋白质的生物制药产品已经成为用于治疗癌症、自身免疫疾病、感染和心血管代谢紊乱的重要药物，并且它们代表了制药工业中增长最快的产品部分之一。基于蛋白质的生物制药产品必须满足非常高的纯度标准。因此，在药物开发、生产、储存和处理的不同阶段监测这些生物制药产品中的任何杂质可能至关重要。

例如，宿主细胞蛋白质(HCP)可存在于使用基于细胞的系统开发的基于蛋白的生物药物中。药物产品中HCP的存在需要进行监测，并且在高于一定量时可能是不可接受的。用于表征HCP的测定的分析方法应显示足够的准确度和分辨率。直接分析可能要求分离出足够大量的产物用于测定，这是不希望的并且只有在选定的情况下才有可能。因此，确定当与极高浓度的活性药物混合时表征样品中的HCP的工作流程和分析测试是具有挑战性的任务。从上文可以理解，需要用于表征样品中的HCP的改进方法。

发明内容

开发生物制药产品的关键标准是监测产品中的杂质。当这样的杂质确实出现时，它们的鉴定和定量构成生物工艺中的重要步骤。

本文公开的示例性实施方案通过提供用于鉴定宿主细胞蛋白质的方法来满足上述需求。

在一个示例性实施方案中，鉴定具有所关注蛋白质的样品基质中的宿主细胞蛋白质的方法可以包括从所关注蛋白质解离宿主细胞蛋白质和使用分子量截止过滤器过滤解离的宿主细胞蛋白质。在该实施方案的一个方面，可以使用蛋白质解离剂进行蛋白质解离。在该实施方案的一个具体方面，蛋白质解离剂可包含脱氧胆酸钠。在该实施方案的另一个具体方面，蛋白质解离剂可包含N-月桂酰肌氨酸。在该实施方案的又另一个具体方面，蛋白质解离剂可包含脱氧胆酸钠和N-月桂酰肌氨酸。在该实施方案的一个具体方面，蛋白质解离剂在性质上可以是可降解的。在该实施方案的一个方面，分子量截止过滤器可具有至少约100KDa的截止值。在该实施方案的另一方面，分子量截止过滤器可具有至少约50KDa的截止值。在该实施方案的一个方面，所述方法可被配置为检测浓度为至少约1ppm的宿主细胞蛋白质。在该实施方案的一个方面，过滤步骤使解离的宿主细胞蛋白质富集至少约50倍。在该实施方案的一个方面，鉴定样品基质中的宿主细胞蛋白质的方法可任选地包括使过滤的宿主细胞蛋白质与水解剂接触。在该实施方案的另一方面，鉴定样品基质中的宿主细胞蛋白质的方法可任选地包括使用质谱仪鉴定宿主细胞蛋白质。