[发明专利]用于鉴定黑果越橘的方法和试剂盒

说明书

本发明提供鉴定植物组合物中的黑果越橘的方法和专门设计用于该方法实施的试剂盒。本发明的方法基于使用PCR扩增对黑果越橘基因组区域中的核酸片段的检测，其中所述基因组区域为内部转录间隔子1、5.8S核糖体RNA基因组区和内部转录间隔子2中的基因组区域。

技术领域

本发明提供了一种基于使用PCR扩增检测特定基因组片段用于鉴定植物组合物中的黑果越橘(Vaccinium myrtillus)的方法。本发明还提供了专门设计用于实施本发明方法的试剂盒。

发明背景

植物提取物广泛用于医疗、保健品、化妆品和食品工业。处理植物提取物时遇到的主要问题之一是不仅要确定其化学组成，还要确定其植物来源，以排除假冒风险。

用于确定植物材料的植物来源的基于遗传的方法是本领域已知的(Parker,T,etal,Field-based species identification o fclosely-related plants using real-time nanopore sequencing.Sci Rep,2017.7(1):p.8345；Group,C.P.W.,A DNA barcodefor land plants.Proc Natl Acad Sci U S A,2009.106(31):p.12794-7；Fazekas,A.J.,et al.,DNA barcoding methods for land plants.Methods Mol Biol,2012.858:p.223)。此类方法基于植物材料中存在的DNA与公开可用数据库中存在的已知DNA序列的比较。例如，WO 2006/020147(The Regents of the University of California)公开了一种用于鉴定存在于植物混合物中的单独生物学遗传成分的方法，所述方法基于基因组座位特异性PCR、单链构象多态性(SSCP)和序列分析的组合。据称该方法能够提供关于组合物的生物成分的信息，而无需事先了解可能存在哪些植物，并能够检测和识别混合物中可能存在的未知生物成分。

从植物样品中遗传鉴定植物的方法也公开于CN102146477,CN106119394,CN1372005,CN107142329,CN107653330,CN105624291,CN105603107,ES2176066,CN104673930,CN102222969,CN102732513,CN105063203,JP2007282626。在一些情况下，用于鉴定植物物种的方法基于PCR扩增检测位于细胞核核糖体RNA编码基因座中包含内部转录间隔子(ITS)区域ITS-1和/或ITS-2的特定序列。在一些情况下(CN1052429、CN105603107、ES2176066)，这些方法旨在识别含有植物材料的商业产品中的掺假。

Jaakola L等人，Food Chemistry vol.123,no.2(2010)pp.494-500，公开了通过DNA条形码和HRM(高分辨率熔解)分析的组合方式，使用能够对野生浆果进行物种特异性鉴定的设计引物对，鉴定商业上重要的浆果物种。黑果越橘使用引物ITSVm2f和ITSVm2r获得位于ITS(内部转录间隔子)区域中的扩增子，并对该扩增子进行HRM分析来鉴定。

CN108642207公开了越桔植物等位基因图谱的构建，以及利用引物特异性PCR扩增鉴定蓝莓品种和相关物种的方法。

Marieschi M.等人，Food Chemistry vol.202(2016)pp.438-444公开了一种可用于多批次分析的、基于序列特征性扩增区域(SCAR)的方法，用于检测黑果越橘和掺假物种的存在。

Koskima Ki JJ等人，European Journal of Plant Pathology,Kluwer AcademicPublishers-vol.125no.4(2009)pp.629-640公开，使用SYBR-绿作为荧光报告分子，通过实时PCR定量越橘基因的相对表达。