[发明专利]质谱分析校准物

说明书

本发明提供了定量来自对象的样品中κ或λ免疫球蛋白轻链的量的方法，其包括：i.提供来自对象的样品；ii.将所述样品与预定量的λ轻链校准物或κ轻链校准物混合以形成混合物；iii.对所述混合物进行质谱分析；以及iv.定量以下中的一种或两种：a)通过将通过质谱分析测定的所述混合物中λ轻链的相对量与通过质谱分析测定的所述混合物中校准物κ轻链的相对量进行比较，定量所述样品中λ轻链的量；和/或b)通过将通过质谱分析测定的所述混合物中κ轻链的相对量与通过质谱分析，最通常为MALDI‑TOF光谱法或液相色谱‑质谱法，测定的所述混合物中校准物λ轻链的相对量进行比较，定量所述样品中κ轻链的量。

本发明涉及κ轻链或λ轻链作为校准物以允许通过质谱分析定量样品中的相对λ或κ轻链的用途，以及涉及含有这种校准物的试剂盒。

抗体分子(也被称为免疫球蛋白)具有双重对称性，并且通常由两条相同的重链和两条相同的轻链组成，每条含有可变结构域和恒定结构域。重链和轻链的可变结构域结合形成抗原结合位点，使得两条链都有助于抗体分子的抗原结合特异性。抗体的基本四聚体结构包含通过二硫键共价连接的两条重链。每条重链转而又经由二硫键与轻链连接。这产生了基本上“Y”形的分子。

重链是在抗体中发现的两种类型的链中较大的链，与较小轻链(25,000Da)相比，具有50,000-77,000Da的典型分子量。

重链有五个主要类别或类别，它们是γ、α、μ、δ和ε，它们分别是IgG、IgA、IgM、IgD和IgE的组成重链。IgG是正常人血清的主要免疫球蛋白，占总免疫球蛋白库的70-75％。这是二级次免疫应答的主要抗体。它形成两条重链加上两条轻链的单一四聚体。

IgM占免疫球蛋白库的大约10％。该分子与J链一起形成五个基本4链结构的五聚体。单个重链具有大约65,000Da的分子量，并且整个分子具有约970,000Da的分子量。IgM主要限于血管内库，并且是主要的早期抗体。

IgA占人血清免疫球蛋白库的15-20％。超过80％的IgA作为单体存在。然而，一些IgA(分泌性IgA)以二聚体形式存在。

IgD占总血浆免疫球蛋白的不到1％。在成熟B细胞的表面膜上发现了IgD。

尽管在正常血清中缺乏IgE，但在嗜碱性粒细胞和肥大细胞的表面膜上发现了IgE。它与变应性疾病(如哮喘和枯草热)相关。

除了这五个主要类别之外，IgG有四个亚类(IgG1、IgG2、IgG3和IgG4)。另外有两个IgA亚类(IgA1和IgA2)。

有两种类型的轻链：Lambda(λ)和Kappa(κ)。在人类中产生的κ分子大约是λ分子的两倍，但是这在一些哺乳动物中是完全不同的。每条链在折叠成一个恒定结构域和一个可变结构域的单多肽链中含有大约220个氨基酸。浆细胞产生五种重链类型中的一种以及κ分子或λ分子。与重链合成相比，通常存在大约40％过量的游离轻链的产生。当轻链分子不与重链分子结合时，它们被称为“游离轻链分子”。κ链通常作为单体存在。λ轻链倾向于形成二聚体。

存在许多与抗体产生细胞相关的增殖性疾病。

在许多这样的增殖性疾病中，浆细胞增殖形成相同浆细胞的单克隆肿瘤。这导致产生大量相同的免疫球蛋白，并且被称为单克隆丙种球蛋白病。

疾病如骨髓瘤和原发性系统性淀粉样变性(AL淀粉样变性)分别占英国癌症死亡的大约1.5％和0.3％。多发性骨髓瘤是非霍奇金淋巴瘤后的第二种常见形式的血液恶性肿瘤。在高加索人群体中，发病率大约为每年百万分之40。通常，多发性骨髓瘤的诊断基于骨髓中过量的单克隆浆细胞、血清或尿液中的单克隆免疫球蛋白以及相关器官或组织损伤(如高钙血症、肾机能不全、贫血或骨骼病变)的存在。骨髓的正常浆细胞含量为约1％，而在多发性骨髓瘤中，该含量通常大于10％，经常大于30％，但可以大于90％。