[发明专利]抑制干扰的药代动力学免疫测定

说明书

本文报道了一种用于确定含血清样品中的双特异性抗体的方法，所述方法包括以下步骤：首先将已经固定化有与所述双特异性抗体特异性结合的捕获抗体的固相与所述样品一起孵育，以形成固定化的捕获抗体‑双特异性抗体‑复合物，此后将所述固相与同所述捕获抗体竞争与所述双特异性抗体的结合的替换抗体一起孵育，并且由此形成包含替换抗体‑双特异性抗体‑复合物的溶液，以及在所述溶液中确定所述替换抗体‑双特异性抗体‑复合物。

技术领域

本发明属于免疫测定领域，更具体地说属于药代动力学免疫测定领域。本文报道了用于在干扰性单特异性抗体存在的情况下检测含血清样品中的双特异性抗体的干扰抑制免疫测定等。

背景技术

为了分析体外或体内来源的样品中的治疗性单克隆抗体(tmAb)，需要进行相应的测定，尤其是在tmAb开发的早期阶段。这需要提供特异性结合试剂，例如用于确定tmAb的抗独特型抗体。

特别是对于tmAb的完整药代动力学评价，了解在类似治疗条件下给药后血浆/血清样品中的可溶性tmAb浓度很重要。

Lee,J.W.,等人(AAPS J.13(2011)99-110)报告称，支持药物开发的生物分析的主要驱动因素是数据的预期用途。测量循环中的mAb及其抗原配体(L)的可靠方法对于评估暴露-应答关系以支持疗效和安全性评价以及剂量选择至关重要。

De Zwart等人(Bioanal.8(2016)2065-2070)在一份白皮书中报道了生物分析方法验证中联合用药的干扰测试。de Zwart等人根据以往经验使用的调查数据得出结论，对于计划内和计划外联合用药，不存在联合用药干扰试验药的LC-MS/MS测定的情况(数据来自389项观察)，而对于基于LBA的测定，调查数据仅确定了36项测定中报告干扰的一项。

配体结合测定(LBA)广泛用于分析蛋白质生物治疗药物和抗原配体(L)，以支持药代动力学/药效学(PK/PD)和安全性评估。

发明内容

本文报道了一种用于确定含血清样品中的至少双特异性(治疗性)抗体的存在或量的免疫测定。更详细地，所述测定是两步测定，包括用于减少来自同样存在于样品中的单特异性(治疗性)抗体的干扰的替换步骤。因此，可以减少在免疫测定中由包含所述至少双特异性抗体的一个结合位点的第二抗体的存在引起的干扰。在根据本发明的免疫测定中，首次采用这种中间替换步骤来减少免疫测定干扰。

根据本发明的一个方面是一种用于确定含血清样品中的多特异性治疗性抗体，优选双特异性抗体的方法，所述方法包括以下步骤：

a)将已经固定化有与所述治疗性抗体特异性结合的捕获抗体的固相与所述样品一起孵育以形成固定化的捕获抗体-治疗性抗体-复合物，

b)任选地洗涤所述固相，其中所述捕获抗体-治疗性抗体-复合物保持与所述固相结合，

c)将所述固相与在空间上干扰所述捕获抗体与所述治疗性抗体的结合，或同所述捕获抗体竞争与所述治疗性抗体的结合，或同所述治疗性抗体上和所述捕获抗体相同的表位结合的替换抗体孵育，从而将治疗性抗体从固相分离并形成包含替换抗体-治疗性抗体-复合物的溶液，

d)在步骤c)中获得的所述溶液中确定所述替换抗体-治疗性抗体-复合物，从而确定含血清样品中的所述治疗性抗体。

根据本发明的进一步方面是一种用于从含血清样品中富集治疗性抗体，优选多特异性，最优选双特异性抗体的方法，所述方法包括以下步骤：

a)将已经固定化有与所述治疗性抗体特异性结合的捕获抗体的固相与所述样品一起孵育以形成固定化的捕获抗体-治疗性抗体-复合物，

b)任选地洗涤所述固相，其中所述捕获抗体-治疗性抗体-复合物保持与所述固相结合，