[发明专利]二维LC-MS/MS系统

说明书

本发明为关于一种通过连续流式2D LC‑MS/MS使用单一LC系统来检测源样品中的一或多种分析物的新颖分析方法。

【技术领域】

本申请要求提交于2019年5月31日的美国临时申请62/855,636的优先权，其内容整体以引证方式并入本文中。

【现有技术】

液相层析串联质谱分析(LC-MS/MS)作为用于检测及测量广泛多种分析物的强大技术出现。其迅速变为用于准确且精确定量来自生物基质的分析物的方法选择。对来自生物基质的样品进行LC-MS/MS分析的主要障碍为存在干扰存在于这些基质中的所关注分析物的鉴别及定量的主要基质组分，诸如磷脂、蛋白质或核苷酸(参见例如,Carmical及Brown,Biomed.Chromatogr.A(2016)30:710-20；及Massood等人,Lipids(2012)47:209-26)。发展生物分析方法的基本步骤需要清洁样品以在样品分析之前消除主要基质杂质。用于样品清洁的方法大致分类为“脱机(offline)”(其为指人工样品制备程序)或“在线(online)”(其为指通过液相层析(LC)系统进行的样品制备程序)(Afonso-Olivares等人,JChromatogr.(2017)1487:54-63；Mokh等人,Sci Total Environ.(2017)609:830-41；及Dong等人,Bioanalysis(2015)7:2227-33)。

最常见脱机样品清除方法中的一者为固相萃取(SPE)，其专注于消除基质组分且使用样品制备筒富集所关注分析物(Vanol等人,Biomed.Chromatogr.(2017)32:1-10；亦参见Afonso-Olivares,Mokh及Dong,见上文)。含有所关注分析物的SPE萃取物经干燥且复原于另一溶剂系统中，该溶剂系统需要与一维(1D)LC-MS/MS分析兼容。干燥且复原样品于不同溶剂系统中的方法称为“溶剂交换”或“缓冲液交换”。此过程为必需的，此为因为用于SPE的溶剂系统通常不与用于1D LC-MS/MS分析的溶剂系统兼容。溶剂交换过程导致样品损失及可再现性降低。此外，SPE筒成本高且过程耗时。为了消除用于样品清除的SPE步骤，已开发在线二维(2D)LC-MS/MS。2DLC-MS/MS使用双管柱系统。通常由亲水性树脂(正相层析)制成的第一管柱用于在将所关注样品引入至第二管柱之前消除主要基质杂质。第二管柱可由疏水性树脂(反相层析)制成且在引入至质谱仪之前自其他干扰分子进一步解析出所关注分析物(Iguiniz and Heinisch,J Pharmaceut Biomed Anal.(2017)145:482-503；Ling等人,Biomed.Chromatogr.(2014)28:1284-93；Pirok等人,Anal Chem.(2019)91:240-63；及Iguiniz等人,Talanta.(2019)195:272-80)。因此，对于传统在线2D LC-MS/MS分析型方法，采用两个不同溶剂系统。此需要针对各管柱的专用泵系统以及允许分析物转移及溶剂交换的多埠分流阀。这些要求使得传统2D LC-MS/MS方法极复杂且昂贵，胜过2D LC-MS/MS的潜在益处。大部分实验室未配备以进行此类型分析。

因此，仍需要精确且又简单的经改良分析方法。

【发明内容】