[发明专利]用于核酸分析的多价结合组合物

权利要求书

1.一种确定靶核酸序列中的核苷酸身份的方法，包括：

a.提供一种组合物，该组合物包含：

i.所述靶核酸序列的两个或更多个拷贝；

ii.与所述靶核酸序列的一个或更多个区域互补的两个或更多个引物核酸分子；和

iii.两个或更多个聚合酶分子；

b.在足以允许在聚合物-核苷酸缀合物与(a)的所述组合物中的所述靶核酸序列的所述两个或更多个拷贝之间形成多价结合复合物的条件下，使所述组合物与所述聚合物-核苷酸缀合物接触，其中所述聚合物-核苷酸缀合物包含两个或更多个核苷酸部分的拷贝和任选的一种或更多种可检测标记；和

c.检测所述多价结合复合物，从而确定所述靶核酸序列中所述核苷酸的身份。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述靶核酸序列是DNA。

3.根据权利要求1或权利要求2所述的方法，其中所述多价结合复合物的检测在不存在未结合的或溶液携带的聚合物-核苷酸缀合物的情况下进行。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述靶核酸序列已被复制或扩增或已通过复制或扩增产生。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中所述一种或更多种可检测标记是荧光标记。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中检测所述多价复合物包括荧光测量。

7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中所述接触包括一种类型的聚合物-核苷酸缀合物的使用。

8.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述接触包括两种或更多种类型的聚合物-核苷酸缀合物的使用。

9.根据权利要求8所述的方法，其中所述两种或更多种类型的聚合物-核苷酸缀合物中的每一种类型都包含不同类型的核苷酸部分。

10.根据权利要求9所述的方法，其中所述接触包括三种类型的聚合物-核苷酸缀合物的使用，并且其中所述三种类型的聚合物-核苷酸缀合物中的每一种类型都包含不同类型的核苷酸部分。

11.根据权利要求1至10中任一项所述的方法，其中所述聚合物-核苷酸缀合物包含封闭的核苷酸部分。

12.根据权利要求11所述的方法，其中所述封闭的核苷酸是3'-O-叠氮甲基核苷酸、3'-O-甲基核苷酸或3'-O-烷基羟胺核苷酸。

13.根据权利要求1至12中任一项所述的方法，其中所述接触在稳定所述多价结合复合物的离子的存在下发生。

14.根据权利要求1至13中任一项所述的方法，其中所述接触在锶离子、镁离子、钙离子或其任意组合的存在下进行。

15.根据权利要求1至14中任一项所述的方法，其中所述聚合酶分子是非催化活性的。

16.根据权利要求1至15中任一项所述的方法，其中所述聚合酶分子已通过突变或化学而变为非催化活性的。

17.根据权利要求1至16中任一项所述的方法，其中所述聚合酶分子已通过缺乏必要的离子或辅因子而变为非催化活性的。

18.根据权利要求1至17中任一项所述的方法，其中所述聚合酶分子是催化活性的。

19.根据权利要求1至18中任一项所述的方法，其中所述聚合物-核苷酸缀合物不包含封闭的核苷酸部分。