[发明专利]使用改进的氧化方案制备寡核苷酸的方法

权利要求书

1.一种用于产生混合的P＝O/P＝S主链寡核苷酸的方法，所述方法包括使用通过将碘、有机溶剂和水混合得到的氧化溶液，根据方案使式I的中间体亚磷酸三酯化合物氧化成式II的磷酸二酯化合物，

其特征在于，所述氧化溶液已经熟化一个时间段，所述时间段足以使所述式I的亚磷酸三酯化合物选择性地氧化成所述式II的磷酸二酯化合物而不氧化硫代磷酸酯核苷酸间键合。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述有机溶剂是吡啶或C_1-6烷基取代的吡啶。

3.根据权利要求2所述的方法，其中吡啶或C_1-6烷基取代的吡啶与水的体积比为从1:1至20:1，优选地从5:1至15:1，更优选地为9:1。

4.根据权利要求2或3所述的方法，其中所述氧化溶液中的碘浓度为10mM至100mM，更优选地为20mM至50mM。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其中所述氧化溶液的熟化在20℃至100℃的温度发生，优选地在30℃至60℃的温度发生。

6.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其中所述氧化溶液已经熟化至少1天、3天、5天、10天、15天或至少20天的时间段。

7.根据权利要求1-6中任一项所述的方法，其中所述方法包括监测pH和电导率，以确定所述时间段是否足以使所述式I的亚磷酸三酯化合物选择性地氧化成所述式II的磷酸二酯化合物而不氧化所述硫代磷酸酯核苷酸间键合。

8.根据权利要求1-7中任一项所述的方法，其中氧化反应中使用的氧化剂的量在1.1当量与15当量之间选择，更优选地在1.5当量与4.5当量之间选择，最优选地在2当量与4当量之间选择。

9.根据权利要求1-8中任一项所述的方法，其中所述氧化反应的反应温度在15℃与27℃之间选择，更优选地在18℃与24℃之间选择。

10.根据权利要求1-9中任一项所述的方法，其中所述寡核苷酸包含任选地经修饰的DNA或RNA核苷单体或其组合，并且长度为10至40个核苷酸，优选地为10至25个核苷酸。