[发明专利]用于等温DNA扩增的方法和组合物在审
| 申请号： | 202080045635.7 | 申请日： | 2020-04-23 |
| 公开（公告）号： | CN114072521A | 公开（公告）日： | 2022-02-18 |
| 发明（设计）人： | 赫尔本·卡罗尔森·马蒂纳斯·宗达格;布拉姆·约翰内斯·特尼斯;纳韦尔·亚历杭德罗·保利诺 | 申请（专利权）人： | 辛沃鲁克斯IP有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6844 | 分类号： | C12Q1/6844 |
| 代理公司： | 北京康信知识产权代理有限责任公司 11240 | 代理人： | 杜升 |
| 地址： | 荷兰*** | 国省代码： | 暂无信息 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 用于 等温 dna 扩增 方法 组合 | ||
1.一种用于扩增模板DNA分子的方法，包括
a)提供模板DNA分子；
b)提供RNA聚合酶、DNA聚合酶以及核糖核苷酸和脱氧核糖核苷酸的组合；
c)将所述材料在合适的缓冲液中培养合适的时间以允许所述模板DNA分子的复制和扩增。
2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述RNA聚合酶是单亚基RNA聚合酶，优选选自T7RNA聚合酶、T3 RNA聚合酶、SP6 RNA聚合酶或它们的变体的组。
3.根据权利要求1或权利要求2所述的方法，其中，所述DNA聚合酶是具有链置换活性的DNA依赖性DNA聚合酶，优选选自Phi29、Bst、Vent DNA聚合酶或它们的组合。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中，所述核糖核苷酸包括至少一种具有嘌呤核碱基，如腺嘌呤或鸟嘌呤或它们的组合的核糖核苷酸。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其中，复制和扩增还包括提供至少一种与所述模板DNA分子互补的寡核苷酸、随机寡核苷酸的混合物或它们的组合。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其中，核苷酸或核糖核苷酸中的至少一种是修饰或标记的，优选使用可检测标记。
7.根据权利要求1-6中任一项所述的方法，其中，通过荧光和/或通过化学手段，例如通过生物素标记的探针或荧光团标记的探针，和/或通过在荧光团缀合的dNTP存在下的扩增检测扩增产物。
8.根据RNA聚合酶用于在DNA模板上提供引物和可选地在脱氧核糖核苷酸存在下通过链置换DNA聚合酶由所述引物扩增所述DNA模板的用途。
9.根据权利要求8所述的用途，其中，所述引物的提供优选包括提供至少一种具有嘌呤核碱基的核糖核苷酸，更优选2或3种选自GTP、ATP和CTP的核糖核苷酸。
10.根据权利要求8或权利要求9所述的用途，用于扩增线性或环状形式的单链或双链DNA分子，包括基因组DNA。
11.根据权利要求8-10中任一项所述的用途，用于出于治疗目的扩增DNA，包括但不限于基因治疗和疫苗。
12.根据权利要求8-10中任一项所述的用途，用于法医或诊断目的，例如基因分型、DNA测序、病毒或细菌DNA检测或核酸突变检测。
13.部件试剂盒，包括RNA聚合酶、链置换DNA聚合酶或它们的混合物，并且可选地包括容纳合适的缓冲液的部件。
14.根据权利要求13所述的部件试剂盒，还包括核糖核苷酸、脱氧核糖核苷酸和/或它们的混合物。
15.根据权利要求13或权利要求14的部件试剂盒用于扩增模板DNA分子的用途。
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