[发明专利]用于细胞的冷冻保存的组合物和方法

说明书

冷冻保存组合包括在组合物中总浓度为300mM或更低的糖类组分；在组合物中总浓度为2M或更低的糖醇组分；和至少一种聚合物组分和白蛋白，条件是该组合物包括少于冷冻保存含量的二甲基亚砜(DMSO)。一种冷冻保存细胞的方法包括向冷冻保存组合物添加细胞；冷冻该组合物；储存冷冻的组合物；解冻该组合物；将细胞从解冻的组合物中移除；和在有效维持细胞活性的条件下培养细胞。冷冻可包括以0.1℃/min至5℃/min的速率进行冷却。该方法可在解冻后无需洗涤步骤下进行。

技术领域

本申请涉及用于冷冻保存细胞的组合物和方法。

延续申请数据

本申请要求于2019年4月30日提交的美国临时申请序列号62/840,617的权益，其通过引用并入本文中。

政府资助

本发明是由政府支持的，在美国国立卫生研究院颁布的EB023880下进行的。政府对本发明有一定的权利。

发明内容

本申请涉及用于冷冻保存细胞的组合物和方法。冷冻保存组合物可包括：糖类组分，在组合物中糖类组分的总浓度为300mM或更低；糖醇组分，在组合物中糖醇的总浓度为2M或更低；以及浓度为1％到15％的至少一种聚合物组分和浓度为0.5％到10％的白蛋白，条件是该组合物包括少于冷冻保存含量的二甲基亚砜(DMSO)。

糖类组分可以1mM到100mM的浓度提供。糖类组分可包括海藻糖、麦芽糖、乳糖、果糖、蔗糖、葡萄糖、葡聚糖、松三糖、棉子糖、黑曲霉三糖、麦芽三糖、麦芽三酮糖(maltotriulose)、蔗果三糖、纤维二糖、壳二糖、乳果糖或其组合。

糖醇组分可以0.2M到1.2M的浓度提供。糖醇组分可包括丙三醇、山梨糖醇、乙二醇、丙二醇、肌醇、木糖醇、甘露醇、阿拉伯糖醇、核糖醇、赤藓糖醇、苏糖醇、甜醇、松醇或其组合。

冷冻保存组合物可进一步包括浓度为0.1％到2.5％的离子组分。冷冻保存组合物可进一步包括浓度为0.1mM到50mM的氨基酸组分。氨基酸组分可包括异亮氨酸、肌氨酸或其组合物。冷冻保存组合物可进一步包括二级氨基酸组分。二级氨基酸组分可包括一种或多种脯氨酸、缬氨酸、丙氨酸、甘氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸、组氨酸、半胱氨酸、色氨酸、酪氨酸、精氨酸、谷氨酰胺、牛磺酸、甜菜碱、依克多因、二甲基甘氨酸、乙基甲基甘氨酸、RGD肽或其组合。

冷冻保存组合物可进一步包括细胞。细胞可以是iPS细胞。细胞可以是活的复苏的冷冻保存细胞。

一种冷冻保存细胞的方法，包括向冷冻保存组合物添加细胞；冷冻所述组合物；将冷冻的组合物储存在低于0℃的温度；解冻组合物；将细胞从解冻的组合物中移除；以及在有效保持细胞活性的条件下培养细胞。组合物的冷冻包括在大于0℃/min和最高达5℃/min的速率进行冷却。该方法可以在解冻后没有洗涤步骤就进行。本公开的冷冻保存方法在限定温度下主动诱导冰核。

附图说明

图1A-1E示出了示例的结果。

图2A-2D示出了示例的结果。

图3A-3C示出了示例的结果。

图4A-4C示出了示例的冷却曲线。

图5示出了示例中所使用的冷冻保存工作流程的图示。

图6A-6C示出了示例的结果。

图7A-7F示出了示例的结果。

图8A-8F示出了示例的结果。

图9A-9F示出了示例的结果。

图10A-10B示出了示例的结果。

图11示出了示例的结果。

图12示出了示例的结果。