[发明专利]可用于治疗庞贝病的组合物

说明书

提供了一种可用于治疗II型糖原贮积病(庞贝)病的重组腺相关病毒(rAAV)。所述rAAV包括AAV衣壳，所述AAV衣壳靶向肌肉、心脏、肾脏和中枢神经系统中的至少一种的细胞并且所述AAV衣壳中包装有载体基因组，所述载体基因组包括在调控序列的控制下编码嵌合融合蛋白的核酸序列，所述嵌合融合蛋白包括信号肽和与人酸性a‑葡萄糖苷酶hGAA780I蛋白融合的vIGF2肽，所述调控序列指导所述嵌合融合蛋白的表达。还提供了制造和使用此rAAV的方法。

背景技术

如嗜神经AAV血清型(例如，AAV9)等嗜神经病毒已被证明在新生和幼年动物中以高剂量静脉内施用时可转导脊髓α运动神经元。这一观察使得最近成功地将AAV9递送应用于治疗患有脊髓性肌萎缩症的婴儿，所述脊髓性肌萎缩症是一种特征在于下运动神经元的选择性死亡的遗传性运动神经元存活(SMN)蛋白缺陷。在一项涉及另一种嗜神经AAV(AAVhu68)的研究中，观察到了类似的结果，其中在全身施用和鞘内(脑脊液)施用后高效转导了脊髓运动神经元和背根神经节的感觉神经元(C.Hinderer等人,《人类基因疗法(HumGene Ther.)》2018年3月；29(3):285-298)。然而，DRG神经元的转导伴随着对这些感觉神经元的毒性和脊髓背束中的继发性轴突病变。无论衣壳血清型或转基因如何，在静脉内和鞘内递送高剂量AAV载体后也遇到了类似的问题(参见J.Hordeaux,《分子疗法：方法与临床发展(Molecular Therapy:MethodsClinical Development)》第10卷,第79-88页,2018年9月)。

庞贝病(Pompe disease)，也称为II型糖原贮积症，是由酸性α-葡萄糖苷酶(GAA)基因中的突变引起的导致心脏(心肌病)、肌肉和运动神经元(神经肌肉疾病)中的糖原积累的溶酶体贮积病。在经典的婴儿庞贝病中，严重的GAA活性丧失会引起多系统和早发性糖原贮积，尤其是在心脏和肌肉内，并在最初几年因心肺衰竭而死亡。婴儿庞贝病的特征还在于神经元(尤其是运动神经元)和神经胶质细胞内显著的糖原贮积。目前的护理标准(酶替代疗法(ERT))在矫正肌肉方面的效果欠佳，并且无法穿过血脑屏障，从而导致经典婴儿庞贝病长期幸存者的神经系统逐渐恶化。接受ERT的患者由于心脏矫正而活得更久，显示出具有进行性神经系统表型的新自然病程。另外，重组人GAA具有高度免疫原性，并且由于骨骼肌摄取不良而必须大量给药。

庞贝病的治疗有若干个未满足的需求，包含需要矫正所述疾病的CNS组分，需要改善肌肉矫正，以及需要更有效、更少免疫原性和/或者更方便的针对当前ERT的替代方案。

发明内容

在某些实施例中，提供了一种表达盒，其包括在调控序列的控制下编码嵌合融合蛋白的核酸序列，所述嵌合融合蛋白包括信号肽和与人酸性α-葡萄糖苷酶(hGAA)融合的vIGF2肽，所述hGAA至少包括hGAA780I的活性位点，所述调控序列指导所述嵌合融合蛋白的表达，其中位置780基于SEQ ID NO:3中的氨基酸序列的位置的编号。在某些实施例中，所述hGAA至少包括SEQ ID NO:3(hGAA780I)的氨基酸204到氨基酸890或与SEQ ID NO:3至少95％相同的在位置780处具有Ile的序列。在某些实施例中，所述hGAA至少包括SEQ ID NO:3的氨基酸204到氨基酸952或与SEQ ID NO:3至少95％相同的在位置780处具有Ile的序列。在某些实施例中，所述hGAA至少包括SEQ ID NO:3的氨基酸123到氨基酸890或与SEQ IDNO:3至少95％相同的在位置780处具有Ile的序列。在某些实施例中，所述hGAA至少包括SEQID NO:3的氨基酸70到氨基酸952或与SEQ ID NO:3至少95％相同的在位置780处具有Ile的序列。在某些实施例中，所述hGAA至少包括SEQ ID NO:3的氨基酸70到氨基酸890或与SEQID NO:3至少95％相同的在位置780处具有Ile的序列。在某些实施例中，所述表达盒进一步包括miR靶序列的至少两个串联重复序列，其中所述至少两个串联重复序列包括至少一个第一miRNA靶序列和至少一个第二miRNA靶序列，所述第一miRNA靶序列和所述第二miRNA靶序列可能相同或不同并且在3'处与编码所述融合蛋白的所述序列可操作地连接。