[发明专利]糖巨肽的制造方法

说明书

提供一种能够以工业规模简便地制造苯丙氨酸含量低的高纯度的糖巨肽的方法。详细地说，提供一种糖巨肽的制造方法，其包含：(A)使包含糖巨肽的乳清蛋白混合物与活性碳接触的工序、以及(B)将糖巨肽从活性碳中分离的工序。

技术领域

本发明涉及糖巨肽的制造方法，详细地说，涉及以工业规模简便地制造苯丙氨酸含量低的高纯度的糖巨肽的方法。

背景技术

苯酮尿症是参与苯丙氨酸代谢的苯丙氨酸羟化酶的功能先天缺陷的疾病，苯酮尿症患者需要限制苯丙氨酸的摄取。因此，需要开发苯酮尿症患者易于摄取的蛋白质源。

糖巨肽是分子量为约8000(无糖链修饰的情况)、分子量为25000～30000(包含糖链修饰的情况)的、氨基酸序列中不包含苯丙氨酸残基的蛋白质。糖巨肽存在于作为制造奶酪等乳制品时的副产品的乳清中。糖巨肽由于在氨基酸序列中不含有苯丙氨酸残基，可以作为苯酮尿症患者易于摄取的蛋白质源而利用。乳清在乳制品的制造中大量地作为副产物而产生，因此可以认为可以从乳清中获得的糖巨肽适合工业生产。

但是，工业性地从乳清中得到的糖巨肽包含苯丙氨酸成分(例如，游离苯丙氨酸、以及包含苯丙氨酸残基的肽和蛋白质)作为杂质，难以将苯丙氨酸成分完全除去。因此，需要开发一种能够从乳清中制造将苯丙氨酸成分尽可能除去了的糖巨肽的方法。

作为这样的方法，已经报道了几种使用离子交换树脂(离子交换色谱)的方法，其是基于亲水性相互作用的方法的一种。

非专利文献1中记载了，通过数个循环的基于阳离子交换树脂等的分离，而制造除去了苯丙氨酸成分的糖巨肽的方法。

非专利文献2中记载了，通过基于酸沉淀和阴离子交换树脂等的分离，而制造除去了苯丙氨酸成分的糖巨肽的方法。

非专利文献3中记载了，通过基于阴离子交换树脂等的分离，而制造除去了苯丙氨酸成分的糖巨肽的方法。

但是，在这些方法中，需要使用离子交换树脂，由于使用盐溶液(经常包含高浓度的盐类)进行溶出操作，因此溶出的糖巨肽溶液中会混入盐类。盐类会影响食品的风味，因此盐类的混入是不优选的，但是在混入盐类后进行透析这样的盐类的交换操作是繁杂的，成本面上较为不利，因此需要开发不需要使用了盐溶液的溶出操作的方法。此外，使用离子交换树脂的方法在成本面上较为不利，并且，由于处理能力不一定高，并不适合工业上的大量生产。

此外，作为苯丙氨酸含量低的肽混合物的制造方法，已经报道了：作为基于疏水性相互作用的方法的一种的使用活性碳的方法、和作为基于分子量的分离法的一种的使用凝胶过滤剂(凝胶过滤色谱)的方法。

例如，专利文献1中记载了一种苯丙氨酸含量低的肽混合物的制造方法(实施例1、2)，其包含：用1种或2种蛋白酶(内肽酶和外肽酶)水解乳白蛋白而得到肽混合物的工序、使肽混合物与活性碳接触而使芳香族氨基酸(苯丙氨酸)吸附到活性碳上的工序、以及除去吸附了芳香族氨基酸的活性碳的工序。

此外，专利文献2中记载了通过包含以下一系列的操作(实施例2)而制造苯丙氨酸含量低的肽混合物的方法：1)用多种蛋白酶(内肽酶和外肽酶)水解乳清蛋白浓缩物，将得到的水解肽混合物以凝胶过滤剂(凝胶过滤色谱)进行回收的工序(实施例1、3)；以及2)用多种蛋白酶水解牛奶酪蛋白，使得到的水解肽混合物与活性碳粉末接触，使苯丙氨酸吸附到活性碳上的工序；以及除去吸附了苯丙氨酸的活性碳的工序。