[发明专利]质粒

说明书

本发明涉及用于在细菌之间进行接合的手段，并且具体地讲本发明涉及包含抗微生物剂的载体(即供体)细菌和使用方法。载体细菌能够将编码所述抗微生物剂的DNA接合转移至靶细胞(即受体细胞)。出于这些目的，本发明提供缺乏功能性hypC2核苷酸序列的新质粒。

技术领域

本发明涉及用于在细菌之间进行接合的手段，并且具体地讲本发明涉及包含抗微生物剂的载体(即供体)细菌和使用方法。载体细菌能够将编码所述抗微生物剂的DNA接合转移至靶细胞(即受体细胞)中。出于这些目的，本发明提供缺乏功能性hypC2核苷酸序列的新质粒。

背景

控制染色体外复制(ori)和转移(tra)的DNA序列彼此不同；即复制序列通常不控制质粒转移，或者反之亦然。复制和转移两者均为利用质粒和宿主编码功能两者的复杂分子过程。细菌接合为遗传信息从一种细菌到另一种细菌的单向和水平传递。转移的遗传物质可为质粒，或者其可为染色体的一部分。具有接合质粒的细菌细胞含有表面结构(性菌毛)，其参与供体和受体细胞的偶联以及遗传信息的转移。接合涉及细胞之间的接触，并且遗传性状的转移可由许多质粒介导。在所有自然转移机制中，接合为最有效的。例如，大肠杆菌的F质粒、粪肠球菌(Enterococcus faecalis)的pCF10质粒和苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)的pXO16质粒采用不同的接合对建立机制，接合聚集体的大小不同，并且其在革兰氏阴性(F)以及革兰氏阳性(pCF10和pXO16)细菌内具有不同的宿主范围。它们的质粒大小也不同；分别为54、100和200 kb。然而，值得注意的是，这些接合系统具有非常重要的共同特征：其能够在液体介质中维持接合转移，并且通常在非常短的时间内达到接近100%的转移效率。因此，接合过程允许保护质粒DNA免受环境核酸酶的影响，并将质粒DNA非常有效地递送到受体细胞中。接合功能为天然质粒编码的。许多接合质粒(和转座子)为已知的，其可在一个物种内(狭窄的宿主范围)或在许多物种之间(广泛的宿主范围)转移相关基因。已报道了许多革兰氏阳性菌属中的可传播质粒，所述革兰氏阳性菌属包括(但不限于)链球菌属(Streptococcus)、葡萄球菌属(Staphylococcus)、芽孢杆菌属(Bacillus)、梭菌属(Clostridium)和诺卡氏菌属(Nocardia)的致病菌株。接合的早期阶段在革兰氏阴性和革兰氏阳性菌中通常不同。革兰氏阴性菌接合质粒中一些转移基因的作用为提供菌毛介导的细胞间接触、接合孔的形成和相关的形态功能。菌毛似乎不参与启动革兰氏阳性菌的接合。

发明概述

本发明提供：

在第一配置中

一种缺乏hypC2核苷酸序列或其同源物的接合质粒。

在第二配置中

一种包含接合质粒的细菌细胞，其中细胞不包含hypC2蛋白或其同源物。

在第三配置中

本发明的质粒在制造组合物中的用途，所述组合物包含含有质粒的第一细胞群，用于在第一和第二细胞彼此接触时，提高质粒从第一细胞到第二群体的细胞的接合转移的频率。

在第四配置中

一种将感兴趣的核酸序列(NSI)从供体细胞转移至受体细胞中的方法，其中NSI包含在质粒中并且质粒包含在供体细胞中，方法包括组合细胞以允许将质粒从供体细胞接合转移至受体细胞，其中质粒为本发明的质粒。

在第五配置中

一种在人类或动物受试者中治疗感染的方法，其中感染为多种细菌细胞(受体细胞)的感染，方法包括：

(i) 将多种供体细菌细胞给予受试者，藉此受体细胞与供体细胞组合，其中每种供体细胞包含本发明的质粒；