[发明专利]用于蛋白纯化的方法

权利要求书

1.一种适于通过离子交换层析纯化的融合蛋白，所述蛋白包含：

(i)目标蛋白

(ii)在N或C末端的肽标签；

其中所述肽标签包含(HR)_n、(PR)_n、(SR)_n或(PSR)_n，其中‘n’是2至6的整数，包括端值。

2.一种融合蛋白，其包含与能够结合离子交换树脂的肽标签直接或间接共价连接的目标蛋白，其中所述肽标签包含(HR)_n、(PR)_n、(SR)_n或(PSR)_n，其中‘n’是2至6的整数，包括端值。

3.根据权利要求1或权利要求2所述的融合蛋白，其中所述肽标签的长度是4至20个氨基酸。

4.根据权利要求3所述的融合蛋白，其中所述肽标签的长度是4至12个氨基酸。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的融合蛋白，其中所述肽标签包含SEQ ID No 4-6、8和9中任一个的氨基酸序列。

6.根据权利要求5所述的融合蛋白，其中所述肽标签由SEQ ID No4-6、8和9中任一个的氨基酸序列组成。

7.根据权利要求1至6中任一项所述的融合蛋白，其进一步在所述目标蛋白和所述肽标签之间包含接头。

8.根据权利要求7所述的融合蛋白，其中所述接头包含GG、GS、SS、SG或GGSGG。

9.根据权利要求1至8中任一项所述的融合蛋白，其中所述目标蛋白是抗原蛋白或载体蛋白。

10.根据权利要求9所述的融合蛋白，其中所述目标蛋白是破伤风类毒素(TT)、白喉类毒素(DT)、CRM₁₉₇、来自空肠弯曲菌的AcrA、来自流感嗜血杆菌的蛋白D、铜绿假单胞菌的外毒素A(EPA)、来自肺炎链球菌的解毒的肺炎球菌溶血素、脑膜炎球菌外膜蛋白复合物(OMPC)、来自金黄色葡萄球菌的解毒的Hla或来自金黄色葡萄球菌的ClfA。

11.根据权利要求10所述的融合蛋白，其中所述目标蛋白是来自铜绿假单胞菌的外毒素A(EPA)。

12.根据权利要求11所述的融合蛋白，其中所述EPA包含SEQ ID NO.10的氨基酸序列或与SEQ ID NO.10至少80％、85％、90％、92％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列。

13.根据权利要求11或权利要求12所述的融合蛋白，其中所述EPA蛋白被修饰使得

a.其包含在对应于SEQ ID NO.10的位置L552的氨基酸位置处的L至V置换，和/或SEQID NO:10的E553或在与SEQ ID NO.10至少80％、85％、90％、92％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列内的等同位置处的缺失；和/或

b.一个或多个氨基酸已被选自以下的一个或多个共有序列置换：D/E-X-N-Z-S/T(SEQID NO.25)和K-D/E-X-N-Z-S/T-K(SEQ ID NO.26)，其中X和Z独立地是除脯氨酸之外的任何氨基酸，所述置换是任选地用K-D-Q-N-R-T-K(SEQ ID NO:27)或K-D-Q-N-A-T-K(SEQ IDNO:28)的置换。

14.根据权利要求11至13中任一项所述的融合蛋白，其中所述目标蛋白包含SEQ IDNO:11的氨基酸序列或与SEQ ID NO.11至少80％、85％、90％、92％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列。