[发明专利]多潜能关节祖细胞、其组合物及制备方法

权利要求书

1.一种治疗关节疾病的方法，包括在有此需要的受试者的关节处施用多潜能关节祖细胞(JPC)，其中从间区获得的所述JPC是Lgr5⁺和/或Col22a1⁺。

2.如权利要求1所述的方法，其中所述关节疾病是韧带和关节软骨创伤或相关的退行性疾病。

3.如权利要求1所述的方法，其中所述关节疾病与骨关节炎或与关节组织相关的损伤有关。

4.如权利要求1所述的方法，其中所述JPC分化为肌腱细胞、十字韧带、滑膜、半月板和/或关节软骨细胞。

5.一种治疗韧带缺损或肌腱缺损的方法，包括在有此需要的受试者的关节处施用多潜能关节祖细胞(JPC)，其中从间区获得的所述JPC表达Mkx和Scx。

6.一种治疗关节软骨细胞或半月板缺损的方法，包括在有此需要的受试者的关节处施用多潜能关节祖细胞(JPC)，其中从间区获得的所述JPC表达Pax9、Cdh13、Lrrc17和Col26a1。

7.一种产生关节祖细胞(JPC)的细胞系的方法，包括以下步骤

(i)提供诱导的多能干细胞(iPSC)或扩增潜能干细胞(ePSC)；

(ii)在糖原合成酶激酶-3β抑制剂的存在下培养iPSC或ePSC；

(iii)激活来自步骤(ii)的iPSC或ePSC的TGF-β信号传导；

(iv)在Fgf2和Mmp2的存在下培养来自步骤(iii)的iPSC或ePSC，其中从(ii)到(iv)步骤的培养为约5天以形成中内胚层；

(v)从所述iPSC或ePSC培养物中去除步骤(ii)的糖原合成酶激酶-3β抑制剂；

(vi)抑制TGF-β信号传导，其中将所述iPSC或ePSC培养约4天以形成中胚层；

(vii)在所述iPSC或ePSC培养物中将所述中胚层分化为JPC；

(viii)激活Wnt信号传导约5天；和

(ix)调节所述iPSC或ePSC培养物中的Hedgehog(HH)浓度。

8.如权利要求7所述的方法，其中所述糖原合成酶激酶-3β抑制剂是CHIR99021。

9.如权利要求7所述的方法，其中所述TGF-β信号传导被激活素A激活。

10.如权利要求7所述的方法，其中所述TGF-β信号传导被Fgf2、Bmp2和Sb431542抑制。

11.如权利要求7所述的方法，其中所述中胚层在Fgf2和Gdf5的存在下分化为JPC。

12.如权利要求7所述的方法，其中通过添加R-spondin来调节所述Wnt信号传导。

13.如权利要求7所述的方法，其中所述iPSC或ePSC包含能够在所述iPSC或ePSC中表达GFP的LGR5-GFP报告基因构建体。

14.如权利要求13所述的方法，进一步包括监测所述iPSC或ePSC中的GFP表达的步骤。

15.通过如权利要求7至14中任一项所述的方法产生的JPC群。

16.一种治疗关节疾病的方法，包括施用如权利要求15所述的JPC群。