[发明专利]带有病毒灭活的纯化目标物质的方法

说明书

本发明涉及一种从包含至少一种杂质的待处理流体开始纯化目标物质的方法，所述方法包括以下步骤：–提供待处理流体的流；–在第一分离单元(1)中通过色谱步骤处理待处理流体的流；–在第一储集器(4)中收集富含目标物质的馏分；–对富含目标物质的馏分进行病毒灭活，所述病毒灭活包括：#将在第一储集器(1)中收集的富含目标物质的馏分经由旁路管线(9)通过第二分离单元(2)；#将病毒灭活溶液经由旁路管线(9)通过第二分离单元(2)；#将富含目标物质的馏分与病毒灭活溶液混合；以及#在第二储集器(5)中收集富含目标物质的馏分和病毒灭活溶液的混合物；从而获得耗尽活性病毒的馏分；–在第二分离单元(2)中通过色谱步骤处理耗尽活性病毒的馏分；以及–在第二分离单元(2)的出口处收集富含目标物质的馏分。

技术领域

本发明涉及包括病毒灭活的用于纯化目标物质的色谱方法。

背景技术

通常通过细胞培养(细菌或真核细胞)生产抗体和其他物质。然后必须通过各种技术纯化由此生产的目标物质，以消除生产环境中存在的杂质。为此，通常这些物质(特别是抗体)要经受捕获步骤(例如通过亲和色谱法)以及一个或多个精制步骤(例如通过离子交换色谱法)。所述纯化方法通常还包括病毒灭活步骤。

例如，文献US9,149,738公开了一种用于纯化分子的方法，该方法使用至少三个相互连接成圈并包含亲和或离子交换基质的分离单元，其中循环进行：第一柱装载有待纯化的样品，同时与第二柱流体连通，同时，第三柱洗脱并再生。然后可以通过在线暴露于酸性pH或使用缓冲液储集器对纯化的分子进行病毒灭活步骤，接着进行流通色谱步骤。

文献WO2012/078677描述了一种用于纯化生物分子的连续方法，包括捕获步骤和病毒灭活步骤，其中，将所述捕获步骤的流收集在容器中，在该容器中通过用酸滴定来调节其pH。然后，将溶液放置失活所需时间，然后转移到另一个容器，在该容器中重新调节其pH值以转移到下一个单元，例如阳离子交换色谱柱。

文献EP2763771和US8,536,316描述了纯化方法，其中在将柱负载了待处理样品之后并在目标分子洗脱之前，通过将病毒灭活缓冲液过柱来进行的。在其他方法中，例如在文献WO2009/045897中记载的那些，病毒灭活是通过在酸性条件下洗脱保留在第一色谱柱上的目标分子并且通过将酸性洗出液在储集器中保持一定的时间来进行的。

文献EP3130384描述了一种纯化分子的方法，包括结合和洗脱色谱步骤和流通纯化步骤(活性炭、阴离子交换色谱和阳离子交换色谱)。结合和洗脱色谱步骤之后可以是病毒灭活，其中病毒灭活剂被在线引入到包括静态混合器的连接管线中，或使用缓冲液储集器。

文献US9,527,010描述了一种用于纯化生物分子的系统，该系统包括两个串联的色谱装置，与连接所述两个色谱装置的导管偶联以测量如pH、电导率或物种浓度的性质的传感器，允许作为所述性质的值的函数向连接两个色谱装置的导管中注入流体的装置，以及过滤器，以消除第二色谱装置的下游的病毒。

需要一种包括病毒灭活的有效的纯化方法，该方法可以在单个设备中实施并由单个计算机程序控制，从而允许设备的总体尺寸减小、纯化更快和纯化质量更好。

发明内容

首先，本发明涉及一种用于在设备中从包含至少一种杂质的待处理流体中纯化目标物质的方法，所述设备包括：

–第一分离单元，包括至少一个色谱柱、流体入口和流体出口；

–第二分离单元，包括至少一个色谱柱、流体入口、流体出口和绕过第二分离单元的所述至少一个色谱柱的旁路管线；

–与第一分离单元的流体出口和第二分离单元的流体入口流体连接的第一储集器；以及

–与第二分离单元的至少一个流体入口和流体出口流体连接的第二储集器；

其中，该方法包括以下步骤：

–提供待处理流体的流；