[发明专利]治疗性蛋白质组合物和方法

说明书

本发明构思的组合物提供了一种治疗性蛋白质，其中变性形式的治疗性蛋白质杂质小于2％。与常规分离方法产生的相应治疗性蛋白质制剂相比，此类组合物提供了增强的比活性和改进的储存和/或血清稳定性的治疗性蛋白质。

本申请请求2019年9月20日提交的、序列号为62/903,659的美国临时专利申请的权益。这些和所有其他引用的外部材料全部通过引用并入本文。如果通过引用并入的参考中对术语的定义或使用与本申请提供的术语的定义不一致或相反，则本申请对该术语的定义被视为具有约束力。

技术领域

本发明的技术领域涉及治疗性蛋白质，具体地，从血液或血液制品中分离的治疗性蛋白质。

背景技术

背景说明包括可能有助于理解本发明的信息。其不是承认本文提供的任何信息是现有技术或与当前要求保护的发明有关，也不是承认任何具体地或隐含地引用的出版物是现有技术。

目前从人类血液制品中分离出了多种用于治疗的蛋白质。这类蛋白质的示例包括白蛋白、免疫球蛋白、α-1抗胰蛋白酶和多种凝血因子。这些治疗性蛋白质经常大量高浓度使用。白蛋白以高浓度(重量百分比高达25％)用于恢复外科手术、创伤和烧伤患者的血容量。免疫球蛋白制剂(通常含有重量百分比约10％的IgG)被用作免疫调节剂，用于治疗各种疾病和病症，除了为免疫应答减弱提供支持外，还可以通过调节补体活性、抑制独特型抗体、饱和巨噬细胞Fc受体和抑制多种炎症介质发挥作用。每周注入α-1抗胰蛋白酶(约60mg/kg体重)用于治疗与α-1抗胰蛋白酶缺乏相关的遗传病或减缓其发展。凝血因子(如因子VIII、因子IX、血管性血友病因子和凝血连锁反应的其他成分)可用于治疗血友病，并以浓缩形式提供，以便通过简单注射进行治疗。

基于所需的数量，此类治疗性蛋白质可以通过规模化生产从血液制品(如血浆)中分离，通常包括沉淀、过滤、再溶解和色谱介质处理等一系列步骤。所需的高纯度通常需要使用多个分离步骤。通常情况下，使用科恩分布分离法分离血清，这涉及逐步添加酒精产生一系列沉淀的步骤。然而，这种规模化生产会导致治疗性蛋白质的变性形式在纯化的组分中累积。这种变性可导致给药后的不良反应、活性降低、储存半衰期缩短(尤其是在液体制剂中)和/或给药后血清半衰期缩短。

因此，仍然需要具有最小杂质和几乎不含变性蛋白质的治疗性蛋白质制剂。

发明内容

本发明主题提供了包含治疗性蛋白质的组合物，所述组合物已通过使其含有较低含量的变性的治疗性蛋白质和/或其他杂质的方式处理。此类组合物与通过常规方法生产的治疗性蛋白质的相应制剂相比提供更高的比活性和/或稳定性。

本发明构思的组合物包括从血液制品(例如贫冷沉淀(cryo-poor)血浆)中分离的治疗性蛋白质，其中治疗性蛋白质以天然形式和变性形式存在，其中所述变性形式占治疗性蛋白质总量或天然形式的治疗性蛋白质的约0.01％至约1％、2％、3％、4％或5％。在一些实施方案中，所述治疗性蛋白质在分离期间暴露于沉淀剂中。在一些实施方案中，所述治疗性蛋白质为α-1抗胰蛋白酶，并且当用活性部位滴定猪胰蛋白酶(使用N-苯甲酰-L-精氨酸-对硝基苯胺盐酸盐(L-BAPNA)作为底物)进行测试时，所述组合物的抑制性大于90％。在一些实施方案中，所述治疗性蛋白质是免疫球蛋白，并且在给药后的体内半衰期比使用科恩分布分离法制备的免疫球蛋白组分至少多5％、10％、15％、20％或25％。在一些实施方案中，治疗性蛋白质至少在4％、5％、8％、10％、15％、20％或25％的浓度下为无色白蛋白。

本发明构思的另一个实施方案是制备如上所述的治疗性蛋白质组合物的方法，通过在约1℃至约6℃的温度下，在沉淀剂存在下解冻冷冻血浆，以生成改性冷沉淀物和改性贫冷沉淀血浆，将改性冷沉淀物从改性低温血浆中分离，将改性贫冷沉淀血浆施加到色谱介质中，而不进行中间沉淀或显著稀释步骤，以产生未结合组分和结合组分，并从未结合组分或结合组分中回收包含约0.01％至约5％变性的治疗性蛋白质的治疗性蛋白质。合适的沉淀剂包括有机酸、有机酸盐(如柠檬酸钠)、无机盐和亲水性聚合物。