[发明专利]病毒载体生产的效价测定

权利要求书

1.一种确定编码至少一种SMN多肽的重组病毒载体的效价的方法，所述方法包括：

(a)用所述重组病毒载体转导修饰的宿主细胞，其中所述修饰的宿主细胞包含相对于相同类型的未修饰的参考宿主细胞降低的所述SMN多肽的表达；

(b)使所述修饰的宿主细胞与用于检测所述SMN多肽的第一剂接触；

(c)使所述修饰的宿主细胞与包含用于检测所述第一剂的检测部分的第二剂接触；以及

(d)检测螺旋体双子(GEM)的存在，从而确定所述至少一种SMN多肽的效价。

2.如权利要求1所述的方法，其中所述重组病毒载体包括腺相关病毒(AAV)载体、腺病毒载体或逆转录病毒载体。

3.如权利要求2所述的方法，其中所述逆转录病毒载体包括慢病毒载体或γ逆转录病毒载体。

4.如权利要求2所述的方法，其中所述AAV载体包括AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV11或其变体。

5.如权利要求4所述的方法，其中所述AAV载体包括AAVhu68。

6.如权利要求4或5所述的方法，其中所述AAV载体包含与鸡-β肌动蛋白启动子(CB7)可操作地连接的SMN1基因。

7.如权利要求4至6中任一项所述的方法，其中所述AAV载体包含侧接所述SMN1基因的两个ITR。

8.如权利要求4至7中任一项所述的方法，其中所述AAV载体包含兔β-球蛋白polyA信号。

9.如权利要求1至8中任一项所述的方法，其中所述修饰的宿主细胞包含SMN1基因的条件性敲低或敲除。

10.如权利要求1至9中任一项所述的方法，其中所述修饰的宿主细胞包含用于条件性敲低SMN1基因的至少一种shRNA。

11.如权利要求9所述的方法，其中所述至少一种shRNA：

(i)包括shRNA 120或shRNA 128；并且/或

(ii)不靶向所述重组病毒载体。

12.如权利要求1至11中任一项所述的方法，其中所述修饰的宿主细胞包括或者是哺乳动物宿主细胞。

13.如权利要求12所述的方法，其中所述修饰的宿主细胞包括或者是人类细胞。

14.如权利要求13所述的方法，其中所述修饰的宿主细胞包括或者是SH-SY5Y细胞。

15.如权利要求14所述的方法，其中所述修饰的宿主细胞包括或者是SH-SY5Y KD细胞。

16.如权利要求1至15中任一项所述的方法，其中，在转导之前，进行以下中的一项或多项：

(i)将宿主细胞冷冻和解冻至少一次；

(ii)将宿主细胞至少传代3次；

(iii)用强力霉素处理宿主细胞；并且/或

(iv)以约5.0×10³至约5.0×10⁴个细胞/孔的密度接种宿主细胞。

17.如权利要求1至15中任一项所述的方法，其中将所述修饰的宿主细胞在24小时内接种并转导。

18.如权利要求1至17中任一项所述的方法，其中转导步骤(b)在通过连续稀释获得的约5种不同MOI下进行。