[发明专利]病毒载体生产的效价测定

说明书

本公开提供用于确定由重组病毒载体编码的有效载荷的效价的灵敏且稳健的测定。特别地，本公开提供确定由用于治疗脊髓性肌萎缩的重组病毒载体表达的SMN多肽的效价的测定。本说明书尤其包括用于确定重组病毒载体的效价(例如，生物活性)，例如相对效价的方法。

相关申请的交叉引用

本申请要求2019年8月8日提交的美国临时申请号62/884,252的优先权，所述美国临时专利申请以引用的方式整体并入本文。

背景技术

病毒载体介导的基因治疗是一个快速发展的治疗领域。在用作治疗之前，将需要评估治疗性病毒载体的许多方面以确定安全性和功效。

因此，仍然需要用于确定重组病毒载体的效价的改进方法。特别地，需要允许改进对由重组病毒载体表达的有效载荷(例如多肽)的效价的确定的方法。

发明内容

本说明书尤其包括用于确定重组病毒载体的效价(例如，生物活性)，例如相对效价的方法。与用于确定由重组病毒载体表达的有效载荷(例如，多肽，诸如SMN多肽)的效价的现有方法相比，本文所述的方法具有改进的特征。在一些实施方案中，相对于相同类型的未修饰的参考宿主细胞，使用具有降低的至少一种有效载荷(例如，至少一种SMN多肽)的表达的修饰的宿主细胞允许改进本文所述的重组病毒载体的效价测定。在一些实施方案中，与其他类型的宿主细胞(例如，原代细胞和/或非人哺乳动物细胞，例如，小鼠细胞)相比，本文所述的方法中使用的修饰的宿主细胞(例如，人修饰的宿主细胞，例如SH-SY5Y KD细胞)更具生理学相关性和/或更易于培养。在一些实施方案中，SH-SY5Y KD细胞包含SMN基因(例如，SMN1或SMN2基因)中的敲低(例如，组成型或条件型)，例如，包含或表达针对SMN基因(例如，SMN1或SMN2基因)的抑制性核酸，例如针对SMN1的shRNA(例如，针对SMN1基因的强力霉素诱导型shRNA，例如shRNA120或shRNA 128)。

此类改进的特征可以包括但不限于：(i)该方法可在完全不使用辅助功能(例如Ad2或Ad5辅助病毒)的情况下进行；(ii)与用相同类型或不同类型的未修饰的参考宿主细胞进行转导相比，转导可能需要较低量的重组病毒载体；(iii)该方法具有低标准偏差；(iv)可以约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或更多的准确度确定效价；(v)可以约5％、约6％、约7％、约8％、约9％或约10％的精确度确定效价；(vi)该方法可以表明本文所述的重组病毒载体的稳定性，例如在重组病毒载体的热应激之后；(vii)本文所述的重组病毒载体的效价不受空衣壳存在的影响；以及/或(viii)能够由于选择修饰的宿主细胞系(例如，包含SMN基因(例如，SMN1或SMN2基因)中的敲低(例如组成型或条件型)的SH-SY5Y KD细胞，例如，包含或表达针对SMN基因(例如，SMN1或SMN2基因)的抑制性核酸，例如，针对SMN1的shRNA(例如，针对SMN1基因的强力霉素诱导型shRNA，例如，shRNA120或shRNA 128))而实现高信噪比。

在一方面，本公开提供了确定编码至少一种SMN多肽的重组病毒载体的效价的方法，所述方法包括：(a)用重组病毒载体转导修饰的宿主细胞，其中修饰的宿主细胞包含相对于相同类型的未修饰的参考宿主细胞降低的至少一种SMN多肽的表达；(b)使修饰的宿主细胞与用于检测SMN多肽的第一剂接触；(c)使修饰的宿主细胞与包含用于检测第一剂的检测部分的第二剂接触；以及(d)检测螺旋体双子(GEM)的存在，从而确定至少一种SMN多肽的效价。