[发明专利]小白蛋白阳性神经细胞的制造方法、细胞及分化诱导剂

说明书

本发明提供一种小白蛋白阳性神经细胞的制造方法，包含在细胞内诱导Ascl1基因、Dlx2基因和MEF2C基因的表达的诱导表达工序，以及培养上述诱导表达后的细胞而由上述细胞分化小白蛋白阳性神经细胞的分化工序。一种细胞，其以能表达的方式导入有Ascl1基因、Dlx2基因和MEF2C基因。以及一种分化诱导剂，其含有Ascl1基因、Dlx2基因和MEF2C基因或它们的基因产物作为有效成分，用于将细胞分化诱导为小白蛋白阳性神经细胞。

技术领域

本发明涉及小白蛋白阳性神经细胞的制造方法、细胞和分化诱导剂。

本申请基于2019年8月29日在日本提出申请的特愿2019-157194号而要求优先权，在此引用其内容。

背景技术

小白蛋白(Parvalbumin)阳性神经细胞是与脑神经系统的疾病相关的重要的神经细胞之一，小白蛋白阳性神经细胞的存在量、功能下降被认为会引发各种精神神经疾病、神经发育障碍(非专利文献1、非专利文献2)。因此，长久以来其功能解析受到关注，特别是近年来，强烈期望由人iPS细胞等多能干细胞来制作小白蛋白阳性神经细胞的技术。

但是，虽然也有报告将部分包含小白蛋白阳性神经细胞等的抑制性神经细胞进行特异性分化诱导的方法，但小白蛋白阳性神经细胞自身的诱导效率极低(非专利文献3)。另外，在非专利文献4中报告了一种小白蛋白阳性神经细胞的出现率为现有诱导法中最高效率的方法，但是，该方法需要经过多个分化诱导工序，且产生小白蛋白阳性神经细胞需要80天左右，然后产生的小白蛋白阳性神经细胞的阳性率为20～30％左右。

现有技术文献

非专利文献

非专利文献1:Lewis DA et al.,Trends Neurosci.2012Jan；35(1):57-67.

非专利文献2:Rodriguez RA et al.,Front Mol Neurosci.2018Apr 24；11:132.

非专利文献3:Yang N.et al.,Nat Methods.2017Jun；14(6):621-628.

非专利文献4:Yuan F.et al.,eLIFE.2018Sep 25；7.pii:e37382.

发明内容

本发明的目的在于提供一种分化诱导工序少、在短时间以高效率制造小白蛋白阳性神经细胞的制造方法、能诱导为上述小白蛋白阳性神经细胞的细胞、和用于分化诱导为上述小白蛋白阳性神经细胞的分化诱导剂。

本发明包含以下方式。

[1]一种小白蛋白阳性神经细胞的制造方法，包含：诱导表达工序，在细胞内诱导Ascl1基因、Dlx2基因和MEF2C基因的表达；以及分化工序，培养上述诱导表达后的细胞而由上述细胞分化小白蛋白阳性神经细胞。

[2]根据[1]所述的小白蛋白阳性神经细胞的制造方法，其中，上述诱导表达工序包含将Ascl1基因和Dlx2基因以能表达的方式导入到上述细胞内的基因导入工序。

[3]根据[2]所述的小白蛋白阳性神经细胞的制造方法，其中，上述诱导表达工序进一步包含以能表达的方式导入MEF2C基因的基因导入工序。

[4]根据[1]～[3]中任一项所述的制造方法，其中，上述Ascl1基因、Dlx2基因和MEF2C基因为四环素调控性(Tet-ON)。

[5]根据[1]～[4]中任一项所述的制造方法，其中，上述诱导表达工序包含同时诱导表达选自微小RNA-9/9^*(miRNA-9/9^*)、微小RNA-124(miRNA-124)和BclxL基因中的至少1种的工序。