[发明专利]靶核酸的检测方法、核酸结合分子的检测方法、及核酸结合能力的评价方法

权利要求书

1.一种靶核酸的检测方法，从碱基序列或修饰状态与所述靶核酸部分不同的非靶核酸中识别并检测靶核酸，

将所述非靶核酸中碱基序列或修饰状态与所述靶核酸不同的区域作为靶区域，将所述靶核酸中碱基序列或修饰状态与所述非靶核酸不同的区域作为对应靶区域，以供试核酸样本为模板，在与所述非靶核酸中的所述靶区域特异性结合的分子存在下，使用与所述靶核酸及所述非靶核酸双方杂交的引物，在所述分子能够与所述非靶核酸结合的温度条件下进行核酸扩增反应，基于有无扩增产物来检测所述靶核酸，其中，与所述非靶核酸中的所述靶区域特异性结合的分子不包括仅由核酸构成的分子。

2.根据权利要求1所述的靶核酸的检测方法，其中，

在通过所述核酸扩增反应得到了扩增产物的情况下，所述供试核酸样本中包含所述靶核酸。

3.根据权利要求1或2所述的靶核酸的检测方法，其中，在65℃以下的温度条件下进行所述核酸扩增反应。

4.根据权利要求1～3中任一项所述的靶核酸的检测方法，其中，所述核酸扩增反应为等温核酸扩增反应。

5.根据权利要求1～4中任一项所述的靶核酸的检测方法，其中，所述核酸扩增反应为重组酶聚合酶扩增法。

6.根据权利要求1～5中任一项所述的靶核酸的检测方法，其中，所述靶核酸中的所述对应靶区域和所述非靶核酸中的所述靶区域的碱基序列不同。

7.根据权利要求6所述的靶核酸的检测方法，其中，所述靶区域为基因突变的突变位点或基因多态性的多态性位点。

8.根据权利要求1～7中任一项所述的靶核酸的检测方法，其中，所述分子为DNA链断裂活性缺失型Cas9蛋白质和gRNA的复合物。

9.根据权利要求8所述的靶核酸的检测方法，其中，所述gRNA特异性识别并结合由与所述非靶核酸中的所述靶区域互补的碱基序列构成的DNA。

10.根据权利要求1～9中任一项所述的靶核酸的检测方法，其中，所述供试核酸样本经亚硫酸氢盐处理，

所述对应靶区域和所述靶区域的甲基化状态存在差别，包含通过亚硫酸氢盐处理而在所述对应靶区域和所述靶区域之间产生差别的碱基。

11.根据权利要求1～7中任一项所述的靶核酸的检测方法，其中，所述分子为RNA链断裂活性缺失型Cas13a蛋白质和gRNA的复合物。

12.根据权利要求11所述的靶核酸的检测方法，其中，所述gRNA特异性识别并结合由与所述非靶核酸中的所述靶区域互补的碱基序列构成的RNA。

13.根据权利要求1～5中任一项所述的靶核酸的检测方法，其中，所述靶核酸中的所述对应靶区域和所述非靶核酸中的所述靶区域的修饰状态不同。

14.根据权利要求13所述的靶核酸的检测方法，其中，所述靶核酸中的所述对应靶区域为未经CpG甲基化修饰的区域，

所述非靶核酸中的所述靶区域为经CpG甲基化修饰的区域，

所述分子为CpG甲基化DNA结合蛋白质。

15.一种用于检测靶核酸的试剂盒，用于权利要求8～10中任一项所述的靶核酸的检测方法，具有：

与所述靶核酸及所述非靶核酸双方杂交的引物、

DNA链断裂活性缺失型Cas9蛋白质、及

gRNA。

16.一种用于检测靶核酸的试剂盒，用于权利要求14所述的靶核酸的检测方法，具有：

与所述靶核酸及所述非靶核酸双方杂交的引物、及

CpG甲基化DNA结合蛋白质。