[发明专利]封装有HPV mRNA的核酸脂质颗粒疫苗

说明书

提供用于预防和/或治疗人乳头瘤病毒引起的感染的疫苗。封装有能够表达人乳头瘤病毒E6抗原及E7抗原的核酸的脂质颗粒，其中脂质包含通式(Ia)所示的阳离子脂质或其药学上允许的盐。式中，R¹及R²独立地表示C₁‑C₃烷基；L¹表示任选具有1个或多个C₂‑C₄烷酰基氧基的C₁₇‑C₁₉烯基；L²表示任选具有1个或多个C₂‑C₄烷酰基氧基的C₁₀‑C₁₉烷基，或任选具有1个或多个C₂‑C₄烷酰基氧基的C₁₀‑C₁₉烯基；p为3或4。

技术领域

本发明涉及封装有HPV mRNA的核酸脂质颗粒疫苗。

背景技术

人乳头瘤病毒(human papillomavirus，HPV)为不具有包膜的具有作为基因组的环状双链DNA的病毒，存在约200种基因型(非专利文献1)。其中存在使感染细胞致癌的基因型，特别是已被证明与以宫颈癌为代表的癌的发病相关的基因型16和18被分类为高风险型(非专利文献2)。

在HPV的基因组中编码8个病毒蛋白质，根据在病毒的生命周期中表达的时期分类为早期基因(E1，E2，E4，E5，E6，E7)和晚期基因(L1， L2)。早期基因对病毒复制及感染细胞的癌化进行调控，L1及L2为成为病毒颗粒外壳(衣壳)的结构蛋白质(非专利文献3)。

HPV感染在扁平上皮的基底层存在的角质细胞前体细胞。对HPV的感染而言，起始于通过构成衣壳的L1蛋白质与存在于宿主细胞膜表面的硫酸乙酰肝素蛋白多糖进行吸附(非专利文献4)。由于担任防御HPV感染的中和抗体是以L1蛋白质作为靶标的，因此在目前上市的预防疫苗中，作为药效成分而包含L1蛋白质的VLP(virus-like particle)抗原。另外，在现有的3种所有的预防疫苗中，包含基因型16和18的L1 VLP抗原。任一种疫苗虽然都在未经历HPV感染的青少年的人群中对HPV基因型16 和18的预防效果有95％以上，但未确认到对宫颈癌及为癌前状态的宫颈上皮内瘤变的治疗效果(非专利文献5)。

在HPV感染细胞中，由于致癌蛋白E6及E7而导致细胞周期异常。是因为承担细胞周期、诱导凋亡性细胞死亡的p53、pRb的功能被E6及 E7阻碍(非专利文献6，7)。已经确认E6及E7中对致癌活性重要的区域，当作为疫苗抗原使用E6及E7时，可以插入灭活突变而提高安全性(非专利文献8-10)。

针对HPV感染的宿主防御免疫为中和抗体的诱导，和细胞毒性T细胞(cytotoxic Tcell，CTL)、辅助性T细胞的诱导。特别是为非结构蛋白质的E6、E7，是诱导CTL的目标抗原，作为HPV感染引起的宫颈癌，及宫颈上皮内瘤变的治疗疫苗抗原受关注(非专利文献11)。

在专利文献1中，记载了HPV基因型6，11，16，18，31，33，39， 45，52及58的E6和E7融合抗原基因序列。在该文献记载的基因序列中，在E6的N末端添加IgE前导序列，在E6和E7的翻译区域序列之间插入了弗林蛋白酶的切割位点。另外，将突变插入E6的p53结合区域和E7的 pRb结合区域，将E6及E7的致癌活性灭活。将该基因序列导入到哺乳类表达质粒中，作为对于HPV的DNA基因疫苗在小鼠模型中实施了药效评价。免疫为使用电穿孔法在小鼠大腿部进行肌内施用。

现有技术文献

非专利文献

非专利文献1：Virology 2013；445：2e10.

非专利文献2：J Natl Cancer Inst 1995；87：796-802.