[发明专利]用于确定肠道寄生虫的存在的方法

权利要求书

1.用于确定生物样品中一种或多种肠道寄生虫的存在的方法，其包括以下步骤：

i)在扩增测定中使所述样品或从所述样品中分离的核酸与寡核苷酸引物接触，以提供用于核酸扩增的反应混合物；

ii)使用从步骤i)中获得的包含来自所述生物样品的DNA作为模板的所述反应混合物进行核酸扩增反应，使得只要所述一种或多种肠道寄生虫的靶序列存在于所述样品中，所述序列就被特异性扩增；和

iii)检测所述反应混合物中扩增的靶序列的存在，其中所述靶序列的存在表明所述样品中存在肠道寄生虫；

其中所述一种或多种肠道寄生虫选自由以下组成的组：短膜壳绦虫、缩小膜壳绦虫、布氏姜片虫、脑胞内原虫属(诸如肠脑炎微孢子虫、家兔脑胞内原虫和脑细胞内原虫)、比氏肠孢子虫、蠕形住肠蛲虫、阔节裂头绦虫、日本海裂头绦虫、曼氏裂体吸虫、人芽囊原虫、十二指肠钩虫和肝蠕虫诸如华支睾吸虫、后睾吸虫属和次睾吸虫属；

其中所述一种或多种靶序列选自由如SEQ ID NO:1-16和46-47所定义的序列组成的组，并且其中所述寡核苷酸引物包含与由如SEQ ID NO:1-16和46-47定义的靶序列之一结合的引物对并且允许在步骤ii)中扩增至少部分所述靶序列。

2.根据权利要求1所述的方法，其中在步骤i)中，使所述样品或从所述样品中分离的核酸与一个或多个引物对接触，所述一个或多个引物对包含以下序列中的一个或若干个的至少15个连续核苷酸或由其组成：

引物对A)，膜壳绦虫属cox1

正向引物：AATTCCTGATGCTTTTGGGTTTTATG(SEQ ID NO:17)

反向引物：AGAACACTGCCGTCTTTACATCTAA(SEQ ID NO:18)

引物对B)，膜壳绦虫属cox1、v2

正向引物：AATTCCTGATGCTTTTGGGTTTTATG(SEQ ID NO:17)

反向引物：AAATACAGCCGTCTTAACATCCAA(SEQ ID NO:19)

引物对C)，布氏姜片虫ITS1

正向引物：CACTGTTCAAGTGGTATTGATTG(SEQ ID NO:20)

反向引物：CCAGGTTATCAGTCCTACCC(SEQ ID NO:21)

引物对D)，脑胞内原虫属18S

正向引物：CTGAGTCCTGAGTGTTAGATAAGA(SEQ ID NO:22)

反向引物：CTAATGCCAATCAATCCCGTG(SEQ ID NO:23)

引物对E)，脑胞内原虫属18S v2

正向引物：GTCCTTCGTGTTAGATAAGATATAAGTC(SEQ ID NO:24)

反向引物：AGATAATGCCAATCAATCCCATG(SEQ ID NO:25)

引物对F)，脑胞内原虫属18S v3

正向引物：GACGAAGATTGAGAGGTCTGA(SEQ ID NO:26)

反向引物：CTAATGCCTATCAATCCCGTG(SEQ ID NO:27)

引物对G)，比氏肠孢子虫18S

正向引物：GAGTGTAGTATAGACTGGCGAA(SEQ ID NO:28)

反向引物：TCGTCCTTGATCCTAAGATACG(SEQ ID NO:29)

引物对H)，蠕形住肠蛲虫ITS

正向引物：GCAGAGCTTTCCAAAATTTATTTCC(SEQ ID NO:30)

反向引物：CCCAAGTTTGAGGGTAATTTCTCG(SEQ ID NO:31)

引物对I)，阔节裂头绦虫/日本海裂头绦虫cox1

正向引物：CCAGTTATTACTGGTGTAAGATTGAA(SEQ ID NO:32)

反向引物：TCAAGCATAACCTGACTCATATAC(SEQ ID NO:33)

引物对J)，阔节裂头绦虫/日本海裂头绦虫cox1 v2

正向引物：CCAGTTATTACTGGTGTAAGATTGAA(SEQ ID NO:34)

反向引物：TCAAGCATAACCTGACTCATATAC(SEQ ID NO:35)

引物对K)，阔节裂头绦虫/日本海裂头绦虫cox1 v3

正向引物：CCAGTTATTACAGGTGTGAGATTG(SEQ ID NO:36)

反向引物：CAAGCATAACCCGACTCGTA(SEQ ID NO:37)

引物对L)，阔节裂头绦虫/日本海裂头绦虫cox1 v4

正向引物：CCAGTTATTACAGGTGTGAGATTG(SEQ ID NO:36)

反向引物：CAAGCATAACCCGACTCGTA(SEQ ID NO:37)

引物对M)，曼氏裂体吸虫cox1

正向引物：AGGTGTTTTCATGACTTTATATGTTGA(SEQ ID NO:38)

反向引物：AGCAGATGCAGATAAAGCCA(SEQ ID NO:39)

引物对N)，人芽囊原虫18S

正向引物：CAGCTTTCGATGGTAGTGTATTG(SEQ ID NO:40)

反向引物：GGCTCCCTCTCCGAAATC(SEQ ID NO:41)

引物对O)，人芽囊原虫18S v2

正向引物：TCAGCTTTCGATGGTAGTATATGG(SEQ ID NO:42)

反向引物：GGCTCCCTCTCCGAAATC(SEQ ID NO:43；

引物对P)，华支睾吸虫/后睾吸虫属/次睾吸虫属18S

正向引物：AGCTCGTAGTTGGATCTGG(SEQ ID NO:44)

反向引物：CCACCAATCATGCTAACACC(SEQ ID NO:45；

引物对Q)，十二指肠钩虫ITS.3.1

正向引物：CAGTGTAGCTTGTGGCAC(SEQ ID NO:48)

反向引物：CAGCTAACGTACATGTTGCAATA(SEQ ID NO:49)；和

引物对R)，十二指肠钩虫ITS.3.2

正向引物：ACAGTGCAGCTTGTGGCA(SEQ ID NO:50)

反向引物：CAGCCAACGTACATGTTGCAATA(SEQ ID NO:51)

其中所述一个或多个引物对与由如SEQ ID No:1-16和46-47定义的靶序列中的至少一个结合。