[发明专利]用于确定肠道寄生虫的存在的方法

说明书

本发明涉及来自患者、食物或环境样品，优选来自粪便样品的肠道寄生虫的检测领域。特别地，本发明提供了一种基于聚合酶链式反应(PCR)的测定方法，其用于检测肠道寄生虫感染，特别是选自由以下组成的组的寄生虫种类的感染：短膜壳绦虫(Hymenolepis nana)、缩小膜壳绦虫(Hymenolepis diminuta)、布氏姜片虫(Fasciolopsis buski)、脑胞内原虫属(Encephalitozoon spp)(诸如肠脑炎微孢子虫(E.intestinalis)、家兔脑胞内原虫(E.cuniculi)和脑细胞内原虫(E.hellem))、比氏肠孢子虫(Enterocytozoon bieneusi)、蠕形住肠蛲虫(Enterobius vermicularis)、阔节裂头绦虫(Diphyllobothrium latum)、日本海裂头绦虫(Diphyllobothrium nihonkaiense)、曼氏裂体吸虫(Schistosoma mansoni)、人芽囊原虫(Blastocystis hominis)、十二指肠钩虫(Ancylostoma duodenale)和肝蠕虫(liver worm)(诸如华支睾吸虫(Clonorchis sinensis)、后睾吸虫属(Opisthorchis spp.)和次睾吸虫属(Metorchis spp))。本发明进一步提供了用于本发明方法的材料，例如引物、引物对和探针。优选地，本发明的方法是用于快速确定临床上重要的肠道寄生虫的多重实时荧光定量PCR测定。

技术领域

本发明涉及来自患者、食物或环境样品，优选来自粪便样品的肠道寄生虫的检测领域。特别地，本发明提供了一种基于聚合酶链式反应(PCR)的测定方法，其用于检测肠道寄生虫感染，特别是选自由以下组成的组的寄生虫种类的感染：短膜壳绦虫(Hymenolepisnana)、缩小膜壳绦虫(Hymenolepis diminuta)、布氏姜片虫(Fasciolopsis buski)、脑胞内原虫属(Encephalitozoon spp)(诸如肠脑炎微孢子虫(E.intestinalis)、家兔脑胞内原虫(E.cuniculi)和脑细胞内原虫(E.hellem))、比氏肠孢子虫(Enterocytozoonbieneusi)、蠕形住肠蛲虫(Enterobius vermicularis)、阔节裂头绦虫(Diphyllobothriumlatum)、日本海裂头绦虫(Diphyllobothrium nihonkaiense)、曼氏裂体吸虫(Schistosomamansoni)、人芽囊原虫(Blastocystis hominis)、十二指肠钩虫(Ancylostoma duodenale)和肝蠕虫(liver worm)(诸如华支睾吸虫(Clonorchis sinensis)、后睾吸虫属(Opisthorchis spp.)和次睾吸虫属(Metorchis spp))。本发明进一步提供了用于本发明方法的材料，例如引物、引物对和探针。优选地，本发明的方法是用于快速确定临床上重要的肠道寄生虫的多重实时荧光定量PCR测定。

背景技术

肠道寄生虫感染是世界范围内的主要健康问题，导致发病率和死亡率，尤其是发展中国家的婴儿死亡率。肠道寄生虫感染也是旅行者报告的问题，并且通常是由食物或水的污染、受感染的土壤和卫生不当引起的。肠道寄生虫感染可能会引起轻微症状，但存在腹痛、出血性腹泻和呕吐的严重感染。这些症状对营养状况、食欲不振、体重减轻和通常会导致贫血的肠道失血产生负面影响。

目前，肠道寄生虫的鉴定还没有统一的标准(Garcia等人,2018)。目前，许多寄生虫的诊断依赖于粪便样品的显微镜检查。众所周知，显微镜检查耗时长，检查效率低，并且对检查者的临床经验要求高。此外，肠道寄生虫可能以囊肿或卵的形式存在，形状与多种寄生虫种类相似，因此无法通过普通光学显微镜相互区分。因此，现有技术方法经常导致误判。免疫诊断也已用于寄生虫检测，但尽管免疫诊断比显微镜检查更有效，但它通常受到灵敏度和特异性的限制。