[发明专利]系列多通道显微术

权利要求书

1.用于检测生物试样的样品中的靶部分的方法，所述方法通过：

d)使所述样品与包含第一抗原识别部分Y和第一荧光部分X的第一缀合物接触，从而使所述第一缀合物的至少一部分结合到被所述第一抗原识别部分Y识别的所述靶部分

e)从所述样品中去除未结合到所述靶部分的所述第一缀合物

f)获得所述样品的第一图像，从而检测用所述第一缀合物标记的所述靶部分

用包含第二抗原识别部分Y’和第二荧光部分X’的至少一种第二缀合物重复步骤a)至c)，从而获得至少一个第二图像，并且其中所述第一和第二抗原识别部分Y’结合到不同的靶部分，其特征在于所述第一图像的强度因降解函数而降低，并随后从所述至少一个第二图像中减去。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于根据由Song等人在Biophysical Journal，第68卷，1995年6月，第2588-2600页中公开的方法将所述降解函数计算为强度降低。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于将所述降解函数计算为强度降低5-50 %。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于在至少2个周期中重复步骤a)至c)，其中在每个周期中获得图像，并且其中在每个周期之后，从当前周期的图像中减去前一个周期的图像。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于在至少2个周期中重复步骤a)至c)，其中在每个周期中获得图像，并且其中在最后一个周期之后，从相应的前一个周期的图像中减去每个周期的图像。

6.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其特征在于所述图像作为像素图形图像获得，并且所述图像的减法通过所述像素的减法算法获得。

7.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其特征在于通过洗涤从所述样品中去除未结合到所述靶部分的所述缀合物。

8.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其特征在于在进行最后一个周期之后，至少部分地通过辐射、氧化或酶处理从所述靶部分中去除结合到所述靶部分的所述缀合物。

9.根据权利要求1-6中任一项所述的方法，其特征在于所述荧光部分Y选自呫吨染料、罗丹明染料、香豆素染料、花青染料、芘染料、噁嗪染料、吡啶基噁唑染料、pyromethene染料、吖啶染料、噁二唑染料、carbopyronine染料、苯并吡喃染料、芴染料、荧光低聚物或荧光聚合物。

10.根据权利要求1-7中任一项所述的方法，其特征在于所述缀合物的所述荧光部分通过暴露于辐射而衰减。

11.根据权利要求1-9所述的方法，其特征在于未结合到所述相应的靶部分的所述第一和第二缀合物的图像用于校准通过暴露于辐射的所述衰减。

12.根据权利要求1-8所述的方法，其特征在于提供了最大吸收相差至少10 nm的至少两个荧光部分Y。