[发明专利]可在无血清培养基中悬浮培养的新型Vero细胞系及其制备方法以及使用新型细胞系制备疫苗用病毒的方法

说明书

本发明涉及一种sVERO 7C2细胞系，其为一种衍生自WHO分发的Vero细胞(非洲绿猴肾细胞系)且能够在无血清组分下悬浮培养的Vero细胞系。此外，本发明涉及一种用于培养Vero细胞的培养方法及一种使用所述Vero细胞制备疫苗用病毒的方法。

技术领域

本申请要求基于2019年10月27日提交的韩国专利申请第10-2019-0154749号的优先权，并且相应申请的说明书和附图中公开的所有内容都被并入本申请。

本发明涉及一种能够在无血清培养基中悬浮培养的来源于Vero的新型细胞系及其制备方法以及使用所述悬浮培养的细胞制备病毒的方法。

背景技术

随着各种类型疫苗的商业化，已经以各种方式开发了制造疫苗的方法。作为传统的疫苗生产方法，一个代表性的例子是使用受精卵生产流感疫苗。在使用受精卵生产疫苗的情况下，难以提供稳定的受精卵供应，因此存在必须调节疫苗生产的限制。另外，必须在无菌设施中饲养适于产品生产的鸡，由此存在成本增加的问题，并且由于难以纯化卵蛋白衍生的成分，因此还存在卵蛋白过敏症者无法接种的缺点。

作为克服使用受精卵生产疫苗的问题的方法，有一种利用细胞培养生产疫苗的方法。由于该疫苗是通过在能够无限生长的动物细胞大规模培养后接种病毒而生产的，因此它可以在短时间内通过大规模生产来供应，并且具有卵蛋白过敏症者可以接种的优点。

这些动物细胞通常是贴壁细胞，并且使用胎牛血清(FBS)进行培养，但是在这种情况下，产品中可能存在未知的动物来源因子，并且产品间可能存在质量差异。另外，胎牛血清比较昂贵，并且存在被如朊病毒、病毒和支原体等感染性蛋白质感染的风险，因此存在产品制造成本的增加，且不能保证安全性的缺点。因此，在疫苗的生产中，优选不使用动物来源的添加剂以及动物来源的血清。

另一方面，悬浮状态下培养细胞的方法作为细胞培养的另一种方法，与贴壁细胞培养方法相比，具有诸多优点，例如易于大规模培养、简化传代过程、减少人力和空间利用。因此，正在进行大量关于无血清悬浮细胞的开发和使用它们进行的病毒增殖的研究。

Vero细胞系是一种已建立的细胞系，因为其对各种病毒如轮状病毒、脊髓灰质炎病毒、流感病毒、日本脑炎病毒和登革热病毒具有高度敏感性，因此能够增殖各种病毒。然而，由于Vero细胞系对表面具有非常强的附着力，因此需要非常大面积的培养容器或微载体来进行大规模培养，这在疫苗制造过程中产生了大量成本。另外，需要除去附着在载体上的细胞的步骤。在这种情况下，使用动物来源的胰蛋白酶，并且随着动物来源组分的使用，存在细胞损失和损伤的可能性。

因此，为了通过安全有效的动物细胞培养来生产疫苗，需要能够在无血清培养基中悬浮培养的Vero细胞系，并且本发明人先前已经研究了能够无血清悬浮培养的Vero细胞系并获得了专利(韩国专利第10-1831284号)。

然而，之前注册专利(韩国专利第10-1831284号)的悬浮Vero细胞系Vero Sky7458在细胞增殖和病毒感染性方面显示出的一些效果有限。

发明内容

技术问题

在本研究中，在开发新细胞的过程中，本发明人已经通过选择具有优异功能的细胞的过程，尝试建立了与之前注册的专利细胞系(Vero Sky 7458)相比具有更优异的细胞增殖、细胞形态和病毒增殖的新的悬浮Vero细胞系。

因此，本发明的目的是提供一种Vero细胞系，其可用于疫苗用病毒增殖，并且能够进行无血清培养和悬浮培养以解决由使用血清和贴壁培养所引起的污染或培养效率低下的问题。

本发明的另一个目的是通过提供一种在细胞增殖或病毒增殖能力方面比之前注册的专利细胞系(Vero Sky 7458)具有更优异效果的细胞系，来提供一种更有效的病毒增殖和疫苗生产方法。

更具体地，本发明的一个目的是提供以下实施方式。