[发明专利]细胞外囊泡的回收方法和采血管

说明书

本发明提供一种对细胞外囊泡的回收有用的手法。更具体而言，本发明提供下述(I)和(II)。(I)包含以下步骤的细胞外囊泡的回收方法：(1)将全血与非离子性表面活性剂和螯合剂混合，生成包含细胞外囊泡、非离子性表面活性剂和螯合剂的混合液的步骤；以及(2)从所述混合液中分离细胞外囊泡的步骤。(II)包含非离子性表面活性剂和螯合剂的采血管。

技术领域

本发明涉及细胞外囊泡的回收方法和采血管等。

背景技术

细胞外囊泡(extracellular vesicle：EV)从各种种类的细胞中分泌，是具有膜结构的微小的囊泡，存在于血液等体液中。作为向细胞外分泌的细胞外囊泡，例如，已知有外泌体(exosome)、微囊泡(ectosome)、凋亡泡(apoptotic ble b)。细胞外囊泡包含具有细胞间信息传递等功能的各种物质，因此以诊断、制药等为目的而对其进行了分析。因此，需要开发能够在这样的分析中应用的、对细胞外囊泡的回收有用的手法。

例如，专利文献1中记载了：缓冲液中的细胞外囊泡与抗CD抗体之间的免疫反应(更具体而言，通过使用磁性粒子和清洗缓冲液，血清与缓冲液的液体介质进行了交换的细胞外囊泡含有缓冲液与抗CD抗体之间的免疫反应)中的非特异吸附可以通过非离子性表面活性剂来抑制(试验例4、图2)。

专利文献2中记载了：虽然在小于约3.0mg/mL(约8mM)这一低浓度的EDTA(螯合剂)的存在下能够提高细胞外囊泡的回收量，但在比这更高的浓度的EDTA的存在下不仅不能提高细胞外囊泡的回收量，反而会使回收量显著降低(实施例1、图1A～1C)。

然而，在临床的血液检查的场景中，作为血液样品，广泛使用可以由全血制备的血浆和血清。此外，已知由于红细胞的破坏而引起的溶血会对血液检查的结果产生影响，因此认为需要避免溶血。并且，在用于制备血液样品的全血的处理中，从处理的简便性和迅速性等的观点出发，临床场景中广泛使用采血管。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：国际公开第2015/068772号

专利文献2：美国专利申请公开第2015/0125864A1说明书

发明内容

本发明所要解决的技术问题

本发明的目的在于：提供对细胞外囊泡的回收有用的手法。

解决技术问题的技术手段

本发明者们进行了深入研究的结果，发现：通过将非离子性表面活性剂和螯合剂与全血混合，能够使从全血中回收的细胞外囊泡的量显著提高。

一般而言，表面活性剂会破坏脂质双分子层而引起红细胞的破坏导致的溶血，因此，在临床场景中，认为在以血液检查为前提的全血的处理中要避免表面活性剂使用。然而，从通过选择使用表面活性剂中的非离子性表面活性剂(特别是，特定的非离子性表面活性剂)，能够易于避免溶血这一点来看，通过将这样的非离子性表面活性剂与螯合剂组合使用，不仅能够使从全血中回收的细胞外囊泡的量显著提高，还能够期待溶血的减少或避免溶血。因此，通过将非离子性表面活性剂和螯合剂适用于全血，能够制备不仅能在细胞外囊泡的分析中使用，还能在通常的血液检查中使用的通用性高的血液样品。

专利文献1中，如上所述，记载了通过非离子性表面活性剂能够抑制缓冲液中的细胞外囊泡与抗CD抗体之间的免疫反应中的非特异吸附。但是，专利文献1中没有记载：将全血与非离子性表面活性剂混合(使非离子性表面活性剂对全血进行作用)；和通过该混合能够使细胞外囊泡的回收量提高。此外，从可以认为通过将非离子性表面活性剂和螯合剂与全血混合所带来的从全血中回收的细胞外囊泡的量的提高与免疫反应中的非特异吸附的抑制是相互独立的2个效果这一点来看(实施例5)，专利文献1中对于本发明没有技术启示或教导。